实验三植物不定芽导快繁技术.pptVIP

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* * 第四章 器官培养 宜职院08.9 目的与要求 了解离体根培养的实践意义,掌握离体根的培养方法,熟悉离体根培养的培养基配方。了解植物茎尖培养的意义,掌握茎尖培养的方法,以及茎尖微繁技术。掌握叶培养概念,离体叶组织培养方法,了解影响叶片组织脱分化和再分化因素。 具有植物离体根培养的认知和进行根培养的基础能力,具有熟练进行植物茎尖培养和茎段培养的能力,具有叶培养认知和进行叶培养的基础能力。 一、根培养的实践意义 1、是进行根系生理代谢研究的最优良试验体系。 2、是研究器官分化、形态建成的良好体系。 3、建立快速生长的根无性系,对药物生产有重要意义。 4、对根细胞培养物进行诱变处理,可筛选突变体,用于育种实践。 第一节 根的培养 二、离体根的培养方法 1、培养步骤: 离体根培养的第一步是要获得无性繁殖系。 方法如下: 种子表面消毒——无菌条件下萌发——根伸长后切取1.0cm长的根尖——接种于培养基——侧根生长——切取侧根的根尖扩大培养——获离体根无性系 胡萝卜根培养 2、一般方法 100ml三角瓶,内装40-50ml培养液,如长时间培养,可采用大型器皿500-1000ml培养液的发酵瓶进行培养。根据需要可在瓶中添加新鲜培养液继续培养或分割转移后继代培养。为避免培养过程中培养基成分变化对生长的影响,可采用流动培养方法。 2、根瘤菌结瘤实验的特殊方法 Raggio1965年等设计了离体根的结瘤实验装置。 此装置由两个部分组成,下部是试管,管中装有含无机盐的营养液,并接种根瘤菌,上部是玻璃盖,盖中有一单向开口的管状凹槽,槽中盛放含有有机化合物的琼脂固体培养基。故有机营养从根基部吸收,无机营养从根尖吸收。 Bunting和Horrocks1964年修改了Raggio等的装置,变为在粗沙中提供无机盐。利用这一技术研究菜豆、大豆等离体根根瘤菌的固氮情况,结果表明这些根瘤菌含有血红蛋白,并能固定大气中的氮。 Raggio 装置 三、离体根培养所用的培养基 离体根培养多用无机离子浓度低的White培养基或其他培养基,MS、B5等也可采用,但必须将其浓度稀释到2/3或1/2。 苜蓿离体根的培养液和西红柿离体根的培养液如下: 成份 苜蓿浓度(mg/L) 西红柿浓度(mg/L) Ca(NO3)2.4H2O 200 143.9 Na2SO4 200 100 KCl 65 40 KNO3 82 NaH2PO4.2H2O 18.6 10.6 MgSO4.7H2O 740 368.5 MnSO4.4H2O 4.5 3.35 FeC6H5O7.3H2O 4. 2.25 ZnSO4.7H2O 2.7 1.34 H3BO3 1.5 0.75 KI 0.8 0.38 CuSO4.5H2O 0.004 0.002 MoO3 0.02

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