福建省自考政府经济学课程考试大纲.docVIP

　　摘要：自由流电泳的分离原理、分离模式、影响分离的因素和条件以及自由流电泳仪器的发展进行了介绍，对近年来自由流电泳在离子、小分子和微粒分离，多肽和蛋白质分离，细胞和细胞器分离，药物对映体分离，微芯片装置白质组学等方面应用研究的进展进行了综述 引用文献73篇 　　? 自由流电泳(free flow electrophoresis，FFE)是、F制备型分离技术，具有可连续分离、多种分离模式、无固体支持介质和分离条件温和等优势，特别适用于生物材料的分离纯化和制备。其明显优势是使大量活性生物材料纯品的获得成为可能。FFE由Barrolier等l和Hannig。于上世纪五六十年代相继提出，此后20年问有大量的研究报道涉及采用FFE分离和表征免疫细胞、血细胞、骨髓细胞、肾细胞、肿瘤细胞、疟原虫、细胞器和细胞膜等“。上世纪90年代中末期，生物技术的飞速发展对生物材料的分离纯化和制备技术的需求日益迫切，FFE具有的优越性使其应用更加广泛，分离样品涉及小离子、肽、酶和蛋白质、核酸、细胞膜、囊泡、细菌、病毒及各种细胞等，并叮用其测量某些物理化学常数…。FFE仪器也在不断地被改进更新…，经过近50年的发展，已发展为伞自动分析仪器，应用范围从生物 样品制备发展到样品分析及前处理，以及分子生物学、生物化学和细胞生物学等领域。此外，FFE在窄问分离科学、：芒：片技术等方面的应用基础研究日渐增多，近年来FFE在蛋白质组学研究中的应用报道不断f“现，其作为大量复杂蛋白质组分分析的前处理技术以及与其他分析技术联用的有关研究正受到广泛关注。 自由流电泳原理及分离模式 1．1 自由流电泳原理 Roman等一对FFE分离原理(见图1)进行了描述。两块平行板构成的分离窜中，电场与溶液流垂直，电泳迁移率不同的组分在电场作用下与液流方向形成不同的偏转角，在分离室末端不同出11位 置流出。式(1)表示影响偏转角的条件因素。 图l 自由流电泳的分离原理 Fig． i Principle of free flow electrophoresis(FFE t90=一tx．EA／(qw) (1) 其中，0为偏转角；肛。为带电离子的电泳迁移率；E 为电场强度；A为电极表面积；q为分离腔的横截面 积；∞为溶液的线速度。 1．2 自由流电泳分离模式 (1)自由流区带电泳(ZE—FFE) 使用组成相同的溶液使分离室内保持恒定的pH和电导值。依据分析物的质荷比，增加电压可增大组分的电泳迁移率，减小缓冲液流速可增加组分的偏转角，从而增加分离度并提高分辨效率，但可能减小分析通量。 (2)自由流等电聚焦电泳(IEF—FFE) 利用连续流动的两性电解质溶液，在分离室内的电场方向形成线性pH梯度。样品随溶液纵向流动，并在电场作用下发生横向偏转，达到其等电点处不再横向移动，被强制聚焦在某位置，不受扩散和对流的影响，仅在溶液流动方向移动。具有不同等电点的蛋白质或肽等两性物质可通过IEF—FFE达到分离。 (3)自由流等速电泳(ITP—FFE) 选用电泳迁移率最高的前导电解液和迁移率最低的尾随电解液，在不同的进样[J同时进样。因样品中各组分的电泳迁移率均在前导电解质和尾随电解质之间，故使不同迁移率的样品组分夹在前导电解质和尾随电 解质问并按迁移率大小排列得到分离。 (4)免疫自由流电泳(IMM—FFE) 组分通过特异性免疫反应形成复合体后具有更大的相对分子质量(肘，)，且电荷性质发生改变。因此，发生免疫反应的组分具有与未发生免疫反应组分不同的质荷比，二者在分离室内的迁移速度和偏转角度形成差 异而得到分离。 1．3 影响分离的理论因素和实验条件 1．3．1 影响分离的理论因素 自由流电泳是一个复杂的动态分离过程，其中影响分离效率的因素有热效应、流体力学、电动力学、电动流体力学等。 (1)热效应的影响 分离过程中电场产生焦耳热，使分离室中心和板壁处形成温度梯度，溶液入口和出H处形成温度差等。分离过程中采用的分离电压的高低、电极面积的大小、溶液的性质与流速、分离腔的宽度等均会影响热效应，如式(2)所示。 H=AE2KtD (2) 其中，H为焦耳热；曰为电场强度；A为电极表面积：，c为溶液电导；t为溶液在分离腔内的停留时间；D为电极问距离。 (2)层流和电渗流的影响 分离室具有一定的厚度，使溶液流动时两板中心处和板壁的流速不同，导致分离室内抛物线形液流的出现。处于分离板中心的组分迁移快，板壁处的组分迁移慢，因而导致带展宽二分离室的厚度越小，层流的影响越大。由于板壁表面还存在双电层，致使板壁产生由电极一端指向另一端的电渗流，处于板壁处的组分易受电渗 流驱动，而分离室中心的样品几乎不受影响。因此板壁处的组分受相互垂直的板壁阻力和电渗流的影响，在溶液流动方向和电场方向分别受流体力学和