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遗传学实验报告 大肠杆菌非中断杂交实验 一、实验结果 1、B?G各培养基菌落数生长情况 表一：B?G各培养基菌落数生长情况 板号 阳性 阴性 不确定 阳性菌落数目 重组频率 B 28 71 2 29 0.29 C 32 66.5 3 33.5 0.335 D 24 74 4 26 0.26 E 18 79 6 21 0.21 F 41 56.5 5 43.5 0.435 G 27 71 4 29 0.29 【注】 （1）为减少实验误差，同一培养基上的菌落数由三个人各数一次，最后取平均值得出结果； （2）阳性菌落数及重组率计算公式： 阳性菌落数=阳性+1/2不确定菌落数 重组频率=每种选择培养基上的阳性菌落数/点种的总菌落数×100% （3）由上表一可得，将重组频率从大到小排列，板号顺序为FCGBDE。 2、B?G各培养基中阳性菌落数与基因重组率对应关系: 表二：B?G各培养基基因重组结果对照表 培养基板号 F C G B D E 基因 lac ade gal arg trp his 重组率 0.435 0.335 0.29 0.29 0.26 0.21 由表二可以得出arg，ade，trp，his，lac，gal从近到远的排列顺序为： lac-ade-gal-arg-trp –his； 供体菌上基因从近到远的顺序为lac-ade-gal-trp-arg-his。 经试验确认全部大肠杆菌染色体要将基因全部转入到受体菌内需要100min，但由于转移过程中各种条件的影响，接合过程往往不时发生中中断，完整染色体进入受体菌的机会很少；而lac基因距离原点最近，所以最先转入。随着时间的增长，DNA链变长则容易断裂，举例原点远的基因转入受体菌群的难度增加，所以距离原点最远的his基因基因导入的最少，重组频率最低。 3、由表二数据作大肠杆菌连锁基因图如下图所示 图1：实验得到的大肠杆菌连锁基因图 图2：大肠杆菌的遗传图示 实验所得大肠杆菌基因顺序：lac-ade-gal-arg-trp –his， 由图谱所得的基因顺序为：lac-purE-gal-trp-his-arg。 对比大肠杆菌的基因顺序，实验所得的gal与arg的重组频率都为0.29，重组频率相等；而arg基因与his基因顺序相反。而通过实验结果可以看出两者之间的阳性菌落数及基因重组率相差不大，一个阳性菌落数为26,另一个为21，而实验中人为因素造成的误差较大，也有可能在阳性菌落计数时出现误差，导致试验结果与理论值不符合。 由图可见，前面的基因相对位置都较为符合，而后面的基因因为太远，这种计算方法不是那么适合，实验结果不是很理想。 4、周三下午组、全年级以及历年非中断杂交实验结果： 表三：周三下午组全班非中断杂交实验结果 板号 组号 B C D E F G 板号排序 一 23.50 30.50 20.25 9.83 46.13 25.00 FCGBDE 二 32.58 41.57 22.19 16.85 60.39 25.28 FCBGDE 三 42.24 36.05 28.49 16.28 50.20 29.85 FBCGDE 四 29.00 32.50 26.00 21.00 43.50 29.00 FCGBDE 五 22.00 37.00 31.00 21.85 66.00 30.00 FCGDBE 六 26.25 54.00 35.50 32.50 87.50 48.00 FCGDEB 平均值 29.86 35.52 25.59 17.16 53.24 27.83 FCBGDE 由表三可以得出，全班同学所做的结果F培养基所代表的的lac基因的重组率最高，是距离远点最近的基因；C培养基所代表的的ade基因大多也相同；但是各小组B培养基所代表的的arg基因的位置相差较大，而理论上B培养基所代表的的arg基因是距离远点最远的基因，我们班实验结果与理论值位置相差较大，分析原因可能是B培养基配制出现了问题。 表四：2013级全年级非中断杂交实验结果 板号 班次 B C D E F G 板号排序 周三上午 18 35 28 28 45 30 FCGDEB 周三下午 30 36 26 17 53 28 FCBGDE 周四上午 10 46 45 19 59 42 FCDGEB 周四下午 17.08 42.13 38.29 20.25 67.63 38.29 FCDGEB\FCGDEB 全年级结果 18.63 39.64 34.25 21.11 56.42 34.62 FCGDEB 由表四可得，本班同学与全年级实验所得的结果比较可以得出：F培养基所代表的的lac基因是距离远点