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生物选修 3 知识点 专题 1: 基因工程 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望， 进行严格的设计， 通过 体外 DNA重组和转基因技术， 赋予 生物以 新的遗传特性 ，创造出 更符合人们需要的新的生物类型和生物产品 。基因工程是在 DN A 分子水平 上进行设计和施工的，又叫做 DNA重组技术 。 （一）基因工程的基本工具 1. “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从 原核生物 中分离纯化出来的。 （2 ）功能：能够识别双链 DNA分子的某种 特定 的核苷酸序列，并且使每一条链中 特定 部位的 两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 断开，因此具有 专一 性。 （3）结果：经限制酶切割产生的 DNA片段末端通常有两种形式： 黏性末端 和 平末端 。 2. “分子缝合针”—— DNA连接酶 (1) 两种 DNA连接酶（ E ·coliDNA 连接酶和 T4- DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合 磷酸二酯 键。 ②区别： E ·coliDNA 连接酶来源于 T 4 噬菌体 ，只能将双链 DNA 片段互补的 黏性末端 之间的 磷酸二酯键连接起来；而 T4 DNA 连接酶能缝合 两种末端 ，但连接平末端的之间的效率较 低 。 (2) 与 DNA聚合酶作用的异同 :DNA 聚合酶只能将 单个核苷酸 加到已有的核苷酸片段的末端， 形 成磷酸二酯键。 DNA连接酶是连接 两个 DNA片段 的末端，形成磷酸二酯键。 3. “分子运输车”—— 载体 （1）载体具备的条件：① 能在受体细胞中复制并稳定保存 。 ② 具有一至多个限制酶切点，供外源 DNA片段插入 。 ③ 具有标记基因，供重组 DNA的鉴定和选择 。 （2 ）最常用的载体是 质粒 , 它是一种 裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有 自我复制能力的双链环状 DNA分子 。 （3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒 ( 二 ) 基因工程的基本操作程序 第一步： 目的基因的获取 1. 目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。 2. 原核基因采取 直接分离 获得， 真核基因是 人工合成 。人工合成目的基因的常用方法有 反转录 法_ 和 化学合成法 _ 。 3.PCR 技术扩增目的基因 （1）原理： DNA双链复制 （2 ）过程：第一步：加热至 90～95 ℃DNA解链 ；第二步：冷却到 55～60 ℃， 引物结合到互补 DNA链 ；第三步：加热至 70 ～75℃， 热稳定 DNA聚合酶从引物起始互补链的合成 。 第二步： 基因表达载体的构建 1. 目的：使目的基因在受体细胞中 稳定存在 ，并且可以 遗传至下一代 ，使目的基因能够 表达和 发挥作用 。 2. 组成： 目的基因 ＋启动子 ＋终止子 ＋标记基因 （1）启动子：是一段有特殊结构的 DNA片段 ，位于基因的 首端 ，是 RNA聚合酶 识别和结合的 部位，能驱动基因 转录出 mRNA，最终获得所需的 蛋白质 。 （2 ）终止子：也是一段有特殊结构的 DNA片段 ，位于基因的 尾端 。 （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中 是否含有目的基因 ，从而将 含有目的基因的细 胞筛选出来。常用的标记基因是