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xxwbymushroom@163.com 实例3 高丝氨酸营养缺陷型菌株的赖氨酸合成途径 高丝氨酸缺陷型 协同反馈抑制 xxwbymushroom@163.com 2. 在次级代谢调节育种中的应用 （1）抗生素增产：抗生素产生菌的营养缺陷株多数生产能力是下降的。然而，在初级或次级代谢产物的分支代谢途径中，营养缺陷型切断初级代谢支路，有可能使抗生素增产。 4.3 营养缺陷型在代谢调节育种中的应用 xxwbymushroom@163.com 实例：四环素、制霉菌素产生菌的脂肪酸缺陷型可增加抗生素。 脂肪酸缺陷型 xxwbymushroom@163.com （2）新产品 实例： 金霉素第六碳原子上甲基是由氮氨酸供应的，如果获得蛋氨酸缺陷型，阻断了蛋氨酸这一区段的合成，导致次级代谢中甲基供给受到限制，结果产生去甲基金霉素，而不产生金霉素。 4.3 营养缺陷型在代谢调节育种中的应用 2. 在次级代谢调节育种中的应用 xxwbymushroom@163.com 概念：渗漏缺陷型(leaky mutants)是一种特殊的营养缺陷型，是遗传性代谢障碍不完全的突变型。其特点是酶活力下降而不完全丧失，并能在基本培养基上少量生长。 筛选的方法：将大量营养缺陷型菌株接种到基本培养基平板上，挑选生长特别慢而菌落小的即可。 应用：正是利用了渗漏缺陷型既能少量合成代谢终产物，又不造成反馈抑制的特点。 4.4 渗漏缺陷型在代谢调节育种中的应用 xxwbymushroom@163.com 概念：抗反馈调节突变株是一种解除合成代谢反馈调节机制的突变型菌株。其特点是所需产物不断积累，不会因其浓度超量而终止生产： 如果由于结构基因突变而使变构酶成为不能和代谢终产物相结合的，便是失去了反馈抑制的突变，称为“抗反馈突变型”； 如果是由于调节基因突变引起调节蛋白不能和代谢终产物相结合而失去阻遏作用的，称为“抗阻遏突变型”。 一般而言，抗阻遏突变结果使胞内酶有可能成倍增长，而抗反馈突变的胞内酶量没有什么变化。但从作用效果上讲，均造成终产物大量积累，而且往往两种突变同时发生，难以区别。通常就统称为“抗反馈调节突变型”。 4.5 抗反馈调节突变株的选育 xxwbymushroom@163.com 在实际应用中，抗反馈调节突变株的选育可以通过以下几个方面： 从遗传上解除反馈调节 (如各种抗性和耐性育种、回复突变子的应用等) 截流或减少终产物堆积 (如借助营养缺陷型或采用渗漏缺陷型等) 移去终产物 (借助膜透性的突变等) 4.5 抗反馈调节突变株的选育 xxwbymushroom@163.com 回复突变引起的抗反馈调节突变株选育 耐自身产物突变株选育 抗终产物结构类似物突变株的选育 累积前体和耐前体突变株的选育 4.5 抗反馈调节突变株的选育 xxwbymushroom@163.com 1. 概念：一种可逆性突变，即具有突变型基因的个体通过再突变又成为野生型表型的过程。 2. 产生的原因 (1) 原有基因的回复突变：指基因内部位点突变引起的逆向突变现象，分以下两种情况： ① 同一基因内的同一个或几个碱基的突变引起的回复，消除了原有突变效应，完全恢复野生基因型及其功能，即真正的回复突变； ② 在同一基因内，但不同的位点碱基的变化，改变了基因的核苷酸序列，补偿了原有突变点已失去的功能，使其出现野生表型，称为基因内抑制突变。 4.5.1 回复突变引起的抗反馈调节突变株 xxwbymushroom@163.com (2) 非原有基因的回复突变 概念：在DNA分子链上的一个基因突变成为突变型，随后在邻近的基因某位点碱基发生突变，抑制了前一个突变基因的效应，重新出现野生型的表型，又称为抑制基因突变。 4.5.1 回复突变引起的抗反馈调节突变株 2. 产生的原因 xxwbymushroom@163.com 区别基因回复突变和抑制基因突变的方法 将回复突变菌株和野生型菌株进行回交试验或杂交重组试验，观察它们的子代是否有突变型出现： ① 有同样的突变型重新出现，说明回复突变和原来突变型不在同一位置而是分开的，属于抑制基因回复突变株； ② 如果杂交后代没有产生突变型，表明回复突变的位置与原突变型位点相同，是真正的回复突变。 4.5.1 回复突变引起的抗反馈调节突变株 3. 回复突变引起的抗反馈调节突变株的筛选 (1) 初级代谢途径障碍性回复突变型 采用回复突变方法来筛选抗反馈调节突变株是根据“原养型→营缺型→原养型”选育途径进行的。二次突变后的情况有以下两种： ① 一种是在原位点发生回复突变，恢复野生型酶活力； ② 另一种是在原突变位点以外位置回复突变。这种回复突变体的表型虽然与原养型相似，但基因型不同，它并不是原有结构基因的恢复，