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微生物遗传实验 张充 2010年11月 实验一 微生物的诱发突变 实验二 抗药性突变株的分离 实验三 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA的转化、筛选 实验四 细菌的三亲接合实验 目的要求 1、了解细菌接合导致遗传重组的基本原理 2、学习细菌三亲接合实验的基本方法 基本原理 细菌接合是指供体菌和受体菌 完整细胞直接接合时供体菌 向受体菌单向传递而导致基因重组的现象。 供体菌：大肠杆菌DH5α（带有可移动的抗性质粒，有转移起始位点，但没有自主转移基因） 辅助菌： E.coli HB101（带有自主转移的抗性质粒，编码诱动基因、转移基因） 受体菌：P.putida（本身没有质粒，染色体上有氯霉素抗性基因） 2. F因子及其在杂交中的行为(pp160-163) 实验器材 菌株和质粒 辅助菌：E.coli HB101（pRK2013/mob+， tra+，Kmr，大小为25Kb左右，辅助质粒，可自主转移），卡那霉素使用浓度为50ppm（母液浓度为50000ppm，用无菌水配） 供体菌： E.coli DH5α（pBBR1MCS-5/mob+， tra-，Gmr，大小为4.7Kb左右，可移动质粒），庆大霉素使用浓度为40ppm（母液浓度为40000ppm，用无菌水配） 受体菌：Pseudomonas putida (Cmr)，（菌株本身没有质粒、染色体上带有氯霉素抗