10.2紫外可见分光光度法教学课件.ppt

上一内容 下一内容 10.2 紫外-可见分光光度计 UV-Vis spectrophotometer * 16-* 一、仪器的主要部件 光源 碘钨灯 氘灯 单色器 测量池 参比池 样品池 光电倍增管 数据处理和仪器控制 光源 样品池 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 * 16-* 光源的基本要求： 光强、稳定、连续辐射、波动小。 钨和卤钨灯：340~2500 nm，用于可见光区； 氢灯和氘灯：150~400nm，多用在紫外区。 1、光路设计的特点和光源 光路特点： 光源、单色器、吸收池、检测器在同一光路上 * 16-* 2、单色器(Mnochromator) 通常置于吸收池的前面！（可防强光照射引起吸收池中物质分解） 其性能直接影响出射光纯度，进而影响灵敏度、选择性和标准曲线的线性范围。 （1）棱镜 （2）光栅：（全息光栅） （3）干涉仪？ * 16-* 3、吸收池(Cell，Container)： 玻璃：只适于可见光区。 石英：适于紫外区和可见光区； 空白＋试样吸收池要匹配：同厚度与通透性 * 16-* 光电池：硒光电池－可见光 硅光电池－紫外、可见光 光电管： 紫敏光电管：铯阴极，200-625nm 红敏光电管：银氧化铯阴极，625-1000nm 光电倍增管：PMT 光多道二极管阵列检测器：DAD 4、检测器 * 16-* 光多道二级管阵列检测器 * 16-* 信号放大 数据转换、处理 打印输出 基于光电子技术 基于化学计量学理论和方法 基于计算机、软件与网络技术 5、讯号处理和显示器 * 16-* 二、仪器类型和光学性能 * 16-* 二、仪器类型和光学性能1、主要的仪器类型 （1）单波长分光光度计 单光束型 特点：一束单色光，给定波长处测量，不能全波扫描。 双光束型（空间分隔、时间分隔） 特点： 自动记录，快速全波扫描。光束几乎同时通过样品池和参比池，可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，适合于结构分析。 * 16-* * 16-* （2）双波长分光光度计 切光器使双波长光（Δλ=1～2nm）交替通过同一吸收池，并测得吸光度差ΔA。Abλ1和Abλ2分别为在λ1和λ2处的背景吸收，当λ1和λ2 相近时，背景吸收近似相等。 特点：混合、混浊试样、无需参比液可消除背景吸收 * 16-* 2、仪器的光学性能 波长范围： 波长准确度： 波长重现性： 透光率和吸光度测量范围： 光度准确性：透光率测量误差值 光度重现性： 分辨率：单色器分辨2条靠近曲线的能力。260nm处△λ＝0.3 杂散光：测光信号较弱的波长处所含杂散光的强度百分比（220nm1%g/mLNaI ≤0.1％） * 16-* （1）波长标度校正： 使用镨-钕玻璃（可见区）和钬玻璃（紫外光区）进行校正。 利用某些元素辐射产生的强原子谱线进行校正； 利用苯蒸气在紫外区有很特征的吸收进行校正。 3、仪器的校正和检验 * 16-* （2）吸光度标度校正： 我国药典：用标准的K2CrO4硫酸溶液校正(0.05mol/L)于25℃用不同波长测定的吸光度 A，调整光度计使其A 达到校正表指定的吸光度。 （3）吸收池的校正（配对）： 将吸收池A、B内分别装入试样和参比溶液测量吸光度，倾出液体洗净后对调装入参和比试样再次测定。要求前后测定小于1%。 * 16-* （4）杂散光的检验： 在较短波长下测定选定溶液的透射比T。药典标准采用一定浓度的NaI（220nm）或NaNO2（380nm）溶液检查，透射比应小于规定值 （5）稳定性检验： 预热，先检透射比0%T（与暗电流有关，规定时间内其变化应符合要求)。再检100%T稳定性。紫外区和可见区各测一次。 杂散光的影响是什么？ 上一内容 下一内容