植物原生质体的分离与融合.pptVIP

实验九 植物原生质体分离及融合 制作人：眼睛咪咪 学习植物原生质体的分离及融合的原理，掌握其操作方法。 一、实验目的 植物原生质体是具有质膜，但去掉了细胞壁的植物细胞，分离的原生质体在培养条件下具有再生新壁，进行连续的细胞分裂．并分化成完整植株的能力，即具有细胞全能性。细胞壁的主要成份是纤维素和果胶质，它们分别经纤维素酶，果胶酶处理即可分解，从而脱去细胞壁。 二、实验原理 由于质膜完全暴露，原生质体具有摄取大分子(如核酸)，细胞器(如核、叶绿体)和细菌，病毒的能力，因此是进行遗传操作，基因转移的好材料。而原生质体融合是实现上述目的的一个极为重要的手段。同种或异种原生质体可在聚乙二醇(PEG)诱导下产生异核体，实现体细胞杂交，实现广泛的遗传重组，创造新的生物类型。 (一)材料：植物叶片(菠菜叶片) (二)用具：倒置显微镜，离心机。过滤筛(100目)，漏斗，烧杯，吸管，长注射 针，注射器(5-10m1)等； 三、实验用品 1．纤维素酶2％，果胶酶l％ ，在0.65M甘露醇，0.05MCaCl2·2H20和0.1％MES中，PH调至5.6-6.0。 2．0.16M CaCl2·2H20溶液(内含0.1％MES)PH5.6。 3．22％蔗糖溶液。 4．30％聚乙二醇(PEG)溶液 5