3-1菊花的组织培养.pptVIP

流水冲洗 实验具体操作过程 实验具体操作过程 （三）接种 1、接种室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精擦洗工作台并用紫外线照射20分钟。 2、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。 实验具体操作过程 插入时应注意方向，不要倒插，茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分。 3、材料的切取和接种 实验具体操作过程 形态学上端在上，形态学下端在下。 进行外植体的接种 接种前用体积分数为70%的酒精将工作台擦拭一遍，打开紫外灯照射20分钟。工作台消毒后，首先点燃酒精灯。 离体的植物器官、组织、细胞 脱分化 愈伤组织 再分化 丛芽 植物体 一、植物组织培养 3、基本过程： 请阅读课本：32页图3-1及右侧文字，理解核心概念——脱分化、再分化、愈伤组织。 根 再分化 ③愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。 ②脱分化（去分化）：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。 ④再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫再分化。 ①外植体：离体的植物器官或组织片段。 相关名词： 离体的植物器官、组织或细胞 植物体 脱分化 愈伤组织 芽 根 再分化 AaBb AaBb 二、影响植物组织培养的因素 阅读教材33页，概括影响植物组织培养的因素。 离体的植物器官、组织或细胞 植物体 脱分化 愈伤组织 芽 根 再分化 影响植物组织培养的因素 1、外植体的选取 2、培养基的配制(MS培养基) 3、不同植物激素浓度的使用顺序和使用量 4、pH、温度、光照等条件 影响植物组织培养的因素 (1)内因 ①植物的种类、材料的 和 等都会影响实验结果。一般来说，容易进行 繁殖的植物容易进行组织培养。 ②菊花的组织培养，一般选择 植株的茎上部新萌生的 作材料。选取生长旺盛嫩枝进行组织培养的原因是 。 嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化 年龄 保存时间的长短 无性 未开花 侧枝 (2)外因 调节剂：生长素、 细胞分裂素 两者用量比例 使用顺序 影响植物组织培养的因素 不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同 1、外植体的选取 影响植物组织培养的因素 2、培养基的配制(MS培养基) 影响植物组织培养的因素 大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等 2、培养基的配制(MS培养基) 影响植物组织培养的因素 3、不同植物激素浓度的使用顺序和使用量 使用顺序 实验结果 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但不利分化 先使用细胞分裂素后使用生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率提高 影响植物组织培养的因素 3、不同植物激素浓度的使用顺序和使用量 生长素细胞分裂素比值 结果 比值高时 促根分化，抑芽形成 比值低时 促芽分化，抑根形成 比值适中 促进愈伤组织生长 离体组织或细胞 植物体 脱分化 细胞分裂素 生长素 愈伤组织 芽 根 再分化 细胞分裂素 生长素 细胞分裂素 生长素 影响植物组织培养的因素 4、pH、温度、光照 菊花： pH=5.8 温度18—22℃ 每日光照12h 植物组织培养过程示意图 上面的示意图中还有什么地方不够完善的？ 没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。 ①细菌污染：菌斑呈粘液状，界限比较明显，一般接种后1－2天即能发现。主要是大肠杆菌和链球菌。 植物组织培养的污染 ②真菌污染：菌斑呈绒毛状、絮状，界限不明显，伴有不同颜色的孢子接种后3－10天才能发现。主要是霉菌污染。 植物组织培养的污染 1、外植体带菌 2、培养基及接种器具灭菌不彻底 3、接种操作时带入 4、环境不清洁 污染途径 离体的植物器官、组织、细胞 脱分化 愈伤组织 再分化 丛芽 植物体 根 再分化 回顾组织培养基本过程： 激素使用顺序及使用比例情况 先使用细胞分裂素；生长素/细胞分裂素 适中 同时使用；生长素/细胞分裂素 低 同时使用；生长素/细胞分裂素 高 活学活