实验五大肠杆菌与沙门氏菌.pptVIP

* 三糖铁琼脂(TSI)成分： 　　蛋白胨 20.0g 　　牛肉膏　3.0g 　　乳 糖 10.0g 　　蔗　糖 10.0g 　　葡萄糖　1.0g 　　硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g 　　酚　红 0.025g或5g/L溶液5mL 　　氯化钠　　　　　　　　　　5.0g 　　硫代硫酸钠　　　　　　　　0.5g 　　琼　脂 12.0g 　　蒸馏水 1000mL 　　除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.4±0.1。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min, 加热煮沸至完全溶解。 　　将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管(12mm×100mm),每管约2～4mL,高压灭菌121℃ 10 min或115℃15 min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。 原理分析： 本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。 　　而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。 　　如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。 实验六 细菌生化特性试验 扬州大学兽医学院 * 实验原理 各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦不同，所以利用这点进行生化试验，可达到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆菌时，生化试验是极其常用的一种方法。 一、目的要求 学习常用的生化实验方法； 掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。 个体为杆状 散在或成对 G－ 二、背景知识介绍 大肠杆菌 中等大小 0.4-0.7×2-3μm 大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原； 与广泛的兽医临床病征有关，如： 犊牛的肠道感染和水泻； 幼猪的水泻和腹泻，断奶仔猪水肿病； 狗的尿道感染； 鸡：脐炎、眼炎、肠炎、肝周炎、肺炎、 气囊炎、腹膜炎、肉芽肿等。 个体为杆状 散在或成对 G－ 沙门氏菌 是一大群寄生于人和动物肠道内、生化特性和抗原结构相似，G－，兼性厌氧的无芽胞直杆菌。 在医学、兽医和公共卫生上均十分重要： 绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性； 能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病； 人类食物中毒的主要病原之一。 伤寒沙门氏菌 鼠伤寒沙门氏菌 除雏沙门和鸡沙门氏菌外， 其余各菌具有周生鞭毛。 三、实验材料 常规接种工具：接种棒、酒精灯等 革兰氏染色液、玻片、滴管 等 菌种: 大肠杆菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组） 沙门氏菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组） 大肠杆菌、沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物； 大肠杆菌、沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物。 培养基： 三糖铁斜面（1支/人） 生化管： 葡、乳、麦、甘、蔗、H2S 、尿、枸（1套/人） 试剂： 吲哚试剂、M.R试剂、V-P试剂 等 四、实验内容 观察 大肠杆菌在普通琼脂上的生长表现； 大肠杆菌在麦康凯平板上生长表现； 沙门氏菌在普通琼脂上的生长表现； 沙门氏菌在麦康凯平板上生长表现； 大肠杆菌与沙门氏菌的革兰氏染色、镜检； 记录结果。 三糖铁琼脂接种 挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面； 置 37℃培养。 生化管接种培养 糖发酵试验： 葡 乳 麦 甘 蔗 H2S试验； 尿素酶试验； 枸橼酸盐利用试验。 葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸 葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸 大肠杆菌 沙门氏菌 大肠杆菌 沙门氏菌 置 37℃培养 吲哚试验 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中，置37℃培养3-5d； 静置分层后，沿试管壁加入吲哚试剂1mL； 上层变为红色者为阳性反应。 乙醚 混匀 分层 吲哚试剂 阳性 阴性 吲哚试验原理 蛋白质中的色氨酸 有些细菌 如大肠埃希氏菌 吲哚 对位二甲基氨基 苯甲醛 + 玫瑰吲哚 红色 ① 试剂配方一： 对二甲基氨基苯甲醛 1g 无水乙醇 95mL 浓盐酸 20mL ② 试剂配方二： 对二甲基氨基苯甲醛 5g 戊醇（或异戊醇） 75mL 浓盐酸 25mL 先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。 M.R试验 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培养3-5d）