高效液相色谱法原理与应用-幻灯片课件.ppt

方法研究 1．波长选择：首先在可见紫外分光光度计上测量样品液的吸收光谱，以选择合适的测量波长，如最灵敏的测量波长并避开其它物质的干扰。从紫外光谱中还可大体知道在HPLC中的响应值，如吸收度小于0.5时，HPLC测定的面积将会很小。 2．流动相选择：尽量采用不是弱电解质的甲醇-水流动相。 4. 影响保留值的因素 溶质结构对保留值的影响： 正相：溶质极性越强，官能团越多，保留值越大 反相：溶质极性越弱，疏水性越强，保留值越大。溶质的保留值与其分子非极性部分的总面积有关，面积大，保留值大。 烷基键合固定相特性对保留值的影响： 反相：键合相烷链长，k大，选择性好。 溶剂性质： 正相：溶剂极性越弱，保留越大 反相：流动相表面张力大、介电常数大，则极性越强。其斥力越大，溶质与固定相键合越强，保留值越大。 盐的影响： 通常加入醋酸盐、硼酸盐、硫酸盐等。无机盐使流动相表面张力增大，对非离子性溶质，使k增加，对离子型溶质，k下降。对碱性有机物有改善峰形的作用。 pH值： 加入酸、碱或缓冲液，控制PH，抑制溶质的离子化，改善峰形。用于分析弱酸、碱。 5 应用 二.液固色谱法 Liquid Solid Chromatography 1. 固定相 极性：硅胶、氧化镁、氧化铝等 非极性：活性炭、高分子多孔微球、碳多孔微球等 2. 流动相 硅胶为固定相时：以弱极性的正构烷烃为主体，