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生物科学专业毕业论文范文 　　 　　生物科学专业研究对象有生物科学家根据生物的发展历史、形态结构特征、营养方式以及它们在生态系统中的作用等，将生物分为若干界。下面是整理的生物科学专业毕业论文范文，欢迎阅读。 　　 　　摘要：为探讨栀子(Gardeniajasminoides)果实中藏花素的合成机理，克隆了栀子类胡萝卜素生物合成的关键酶八氢番茄红素合成酶(GjPSY)基因的全长cDNA。结果表明，推导的GjPSY氨基酸序列与双子叶植物来源的GjPSY亲缘关系较近。采用HPLC检测栀子果实中的藏花素-1含量为(3.96±1.48)mgg–1，在叶片中未检出。通过RT-PCR分析表明，GjPSY在栀子叶片和果实中均有表达，且表达水平一致。因此推测，GjPSY的转录水平与果实中藏花素-1的合成无关。 　　 　　关键词：栀子;阿朴类胡萝卜素;藏花素;八氢番茄红素合成酶;基因表达 　　 　　1材料和方法 　　 　　1.1材料和试剂栀子(Gardeniajasminoides)植株培养于广东药学院。采集栀子成熟叶片和花后16周的栀子果实，果肉为橙色。所有材料贮存于–80℃。CreatorTMSMARTTMcDNA文库构建试剂盒购自Clontech公司。PrimescriptonestepRT-PCR试剂盒购自TaKaRa大连公司。藏花素-1(Crocin-1)的对照品购于Sigma-Aldrich公司。乙腈、甲醇为色谱纯，其它生化试剂等为分析纯。 　　 　　1.2藏花素-1含量的测定以改良的HPLC测定栀子叶片和果实中藏花素-1(Crocin-1)的含量。叶片和果实在液氮中研磨后以50%(V/V)的甲醇-水溶液提取，在超声处理30min后以10000×g离心10min，取上清液在–20℃下贮存。HPLC分析时，上清液以0.45μm滤膜过滤，以DiamonsilTMC18(2)柱(250mm×4.6mm,5μm)(Dikma公司，中国)分析，梯度洗脱。 　　 　　仪器为Waters2995HPLC仪(Waters公司,美国)，配备2996光电二极管阵列检测器检测。数据分析图1Crocin的生物合成途径。IPP：异戊烯焦磷酸;DMAPP：二甲基丙烯焦磷酸;GPP：香叶基焦磷酸;GGPP：香叶基香叶基焦磷酸。Fig.1Biosynthesispathwayofcrocin.IPP:Isopentenyldiphosphate;DMAPP:Dimethylallyldiphosphate;GPP:Geranyldiphosphate;GGPP: 　　 　　Geranylgeranylpyrophosphate.第5期441以Empower2软件完成。洗脱条件为：10%~20%乙腈溶液(乙腈/水，V/V)，0~20min;20%~50%乙腈溶液，20~25min，流速为1mLmin–1，检测波长440nm。目标峰通过与藏花素-1对照品的保留时间和吸收光谱的比较而确定。通过标准曲线确定藏花素-1的含量，共进行3次重复实验。 　　 　　1.3GjPSY基因的克隆以CTAB(Hexadecyltrimethylammoniumbromide)法提取栀子果实中的总RNA。按照CreatorTMSMARTTMcDNA文库构建试剂盒的说明书从总RNA构建栀子果实的cDNA文库。将获得的SMART双链cDNA克隆接入pDNR-LIB载体并转化大肠杆菌(Escherichiacoli)DH-5α。 　　 　　根据植物八氢番茄红素合成酶基因PSY的保守区设计简并引物，F1：5′-ATHTGGGATHTAY-GTNTGG-3′和F2：5′-RAARTTRTTRTARTCRTTN-GCYTC-3′，从cDNA文库的细菌裂解液中扩增PSY基因。获得了GjPSY基因的中间片段，将该片段回收并测序，命名为GjPSY-M。根据GjPSY-M片段序列分别设计5′端特异引物GSP1：5′-GCGATA-CAACAATAGCGATGCCCATACAG-3′和3′端特异引物GSP2：5′-GTGCAGGAGAACGGATGAGC-TGGTT-3′，配合文库构建试剂盒提供的5′端和3′端的质粒检测通用引物，采用RACE方法从cDNA文库中获得GjPSY基因的5′端和3′端序列。获得的片段分别命名为5′GjPSY和3′GjPSY，将片段回收和测序并进行序列分析，与GjPSY-M拼接出GjPSY的全长cDNA。根据全长GjPSY序列，经过BLAST比对和开放阅读框(ORF)序列分析，分别设计引物F1：5′-CGCCATTAATATGTCTGTCGCTTTGC-TATGGGTTG-3′和F2：5′-ATGCTCGAGGGCCTT-TGCTAGTGGAGATGATGTTCT-3