第二章染色体与DNA2.pptVIP

（2）聚丙烯酰胺凝胶电泳 以聚丙烯酰胺作支持物。常用垂直板电泳。单体丙烯酰胺在加入交联剂后，就成聚丙烯酰胺。由于这种凝胶的孔径比琼脂糖凝胶的要小，所以可用于分析分子量小于1 000bp的DNA片段。 可用同位素标记、荧光标记、银染等手段来检测。 5、DNA的变性和复性 （1）DNA变性(denaturation) DNA变性指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。变性时维持双螺旋稳定性的氢键断裂，碱基间的堆积力遭到破坏，但不涉及到其一级结构的改变。 凡能破坏双螺旋稳定性的因素，如加热、极端的pH、有机试剂甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等，均可引起核酸分子变性。 变性能够引起理化及生物学性质的改变 1）溶液粘度降低。 2）溶液旋光性发生改变。 3）增色效应(hyperchromic effect) 当浓度都为50μg/ml时， Double strained DNA A260=1.00 Single strained DNA (完全变性DNA) A260=1.37 单核苷酸的等比例混合物 A260=1.60 增色效应举例 （2） 熔解温度(Tm, melting temperature) 通常将核酸加热变性过程中，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为核酸的解链温度，由于这一现象和结晶的熔解相类似，又称熔解温度(Tm, melting temperature)。 * 第二节 DNA 一、DNA的结构与性质 二、DNA的复制与调控 三、DNA的突变与修复 四、DNA的转座 一、DNA的结构与性质 核酸的基本结构单位是核苷酸（nucleotide），核酸是由几百甚至几千万个核苷酸聚合而成的生物大分子，所以又称多聚核苷酸（polynucleotide）。 每分子核苷酸含有一分子磷酸、一分子含氮碱基和一分子戊糖 （一）DNA的碱基组成 嘌呤 嘧啶 组成DNA分子的4种碱基：腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（C）通过磷酸二酯链连接形成生物大分子 多聚核苷酸链中新生磷酸糖苷键的产生过程示意图 (1) 同一生物的不同组织的DNA碱基组成相同； 碱基组成Chargaff定则 (4) 不同生物来源的DNA碱基组成不同，表现在A＋T/G＋C比值的不同； (2) 一种生物DNA碱基组成不随生物体的年龄、营养状态或者环境变化而改变； (3) 几乎所有的DNA，无论种属来源如何，其腺嘌呤摩尔含量与胸腺嘧啶摩尔含量相同([A]=[T])，鸟嘌呤摩尔含量与胞嘧啶摩尔含量相同([G]=[C])，总的嘌呤摩尔含量与总的嘧啶摩尔含量相同([A＋G]=[C＋T])。 （二）DNA的结构（教材p.31-36） 1、DNA的一级结构 DNA的一级结构是由数量极其庞大的四种脱氧核糖核苷酸，即脱氧腺嘌呤核苷酸(dAMP)、脱氧鸟嘌呤核苷酸（dGMP）、脱氧胞嘧啶核苷酸（dCMP）和脱氧胸腺嘧啶核苷酸（dTMP），通过3,5-磷酸二酯键连接起来的直线形或环形多聚体。 表示一个核酸分子结构的方法由繁至简有许多种，一般约定，碱基序列的书写是由左向右书写，左侧是5′末端，右侧为3′末端。 2、DNA的二级结构------双螺旋结构模型(double helix model) （1）B-DNA的结构 B-DNA具有以下特征： 第一、在DNA分子中，两股DNA链围绕一假想的共同轴心形成一右手螺旋结构，双螺旋的螺距为3.4nm，直径为2.0nm。 第二、链的骨架(backbone)由交替出现的、亲水的脱氧核糖基和磷酸基构成，位于双螺旋的外侧。 第三、碱基位于双螺旋的内侧，两股链中的嘌呤和嘧啶碱基以其疏水的、近于平面的环形结构彼此密切相近，平面与双螺旋的长轴相垂直。一股链中的嘌呤碱基与另一股链中位于同一平面的嘧啶碱基之间以氢链相连，称为碱基互补配对或碱基配对(base pairing)，碱基对层间的距离为0.34nm。碱基互补配对总是出现于腺嘌呤与胸腺嘧啶之间(A=T)，形成两个氢键；或者出现于鸟嘌呤与胞嘧啶之间(G=C)，形成三个氢键。（如下图）碱基互补原则具有极重要的生物学意义。DNA复制、转录、反转录等的分子基础都是碱基互补配对。 第四、DNA双螺旋中的两股链走向是反平行的，一股链是5′→3′走向，另一股链是3′→5′走向。两股链之间在空间上形成一条大沟(major groove)和一条小沟(minor groove)，这是蛋白质识别DNA的碱基序列，与其发生相互作用的基础。 （2）A-DNA的结构 A-DNA也是由反向的两条多核苷酸链组成的双螺旋，也为右手螺旋，但是螺体较宽而短，碱基对与中心轴的倾角也不同，呈19°。大沟变窄、变深，小沟变宽、变浅。 （3）Z