Westernblot蛋白质双向电泳的原理方法和在医疗中的应用讲义.pptVIP

Westernblot蛋白质双向电泳的原理方法和在医疗中的应用;*;*;*;*;*; 在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来检测。 ; 蛋白样品的制备;*; 优点： 1.快速（一种抗体） 2.没有二抗交叉反应引起的非特异性条带 缺点： 1.免疫反应性降低 2.无信号二级放大 3.抗体标记费时昂贵,使用不方便 ; 优点： 1. 免疫特异性不受标记影响 2. 信号放大灵敏度高（多个二抗结合位点） 3. 多种标记的二抗可供选择 4. 可选择不同的Marker 缺点： 1. 交叉反应引起的非特异性条带 2. 额外的二抗孵育以及条件优化;直接法与用二抗的间接法相比有诸多不足，标记可用于很多种不同特异性的一抗，避免了标记很多一抗的需要，同时因为一抗结合不知一个二抗分子，所以二抗可以增强信号，所以一般情况下都采用间接法进行检测; Western Blotting间接法操作流程;;*;预混分子量标准 高分子量标准 低分子量标准 宽分子量标准 预染分子量标准 单色预染 多色预染 修饰分子量标准 糖基化 磷酸化 荧光标记 ;高分子量标准 低分子量标准 宽分子量标准;单色预染 多色预染;糖基化 磷酸化 荧光标记;; 选择标准 1.膜与目的蛋白分子的结合能力（也就是单位面积的膜能