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重组基因导入受体细胞 生物与食品工程学院 重组基因导入植物受体细胞 土壤农杆菌介导的Ti质粒转化 土壤农杆菌是一类土壤习居菌，革兰氏染色曾阴性，能感染双子叶植物和裸子植物，对绝大多数单子叶植物无感染能力。 外植体 用于植物基因转化操作的受体通常称为外植体 土壤农杆菌Ti质粒转化基本程序 外植体的选择 组织 年龄 再生能力 接种 浸泡，时间：几秒到几分钟，不超过30分钟 共培养 外植体与农杆菌共培养，时间：几天 脱菌培养 用抗生素除去多余的农杆菌 继续培养 筛选 叶盘法转化植物细胞 用打孔器获取圆型小片（叶盘） 在农杆菌菌液中浸泡 长芽培养 生根培养 整体植株接种转化 人为在植株上造成创伤 在植株表面接种农杆菌 获得转化的植物愈伤组织或转基因植株 叶盘转化与整体植株转化的特点： 优点：操作简单、实用性广 缺点：会产生嵌合体 原生质体共培养转化法 从幼苗嫩叶制备原生质体 - 悬浮液 在培养皿中培养 原生质体刚形成细胞壁时，添加农杆菌 培养32h后，洗去游离的农杆菌 继续培养，筛选 优点：转化植株来源于同一个细胞，减少了嵌合体的发生 缺点：原生质体再生困难，成功率低 悬浮细胞共培养转化法 建立悬浮细胞系 悬浮细胞与农杆菌液混合 转移到固体培养基 筛选 培养成苗 类似于原生质体共培养 植物病毒介导基因转移 植物病毒通过感染植物细胞将特定的基因整合到染色体