现代生物工程与技术实验2016 (2).pptVIP

现代生物工程与技术实验 产蛋白酶K毕赤酵母重组菌株高密度发酵 及酶学性质分析 彭 楠 nanp@mail.hzau.edu.cn华中农业大学生命科学技术学院 检测部分 分组： 共8组，1-7组各4人；8组5人； 依据学号顺序分组； 课程过程中四次考勤，计入平时成绩。 福林酚法测蛋白酶活 酪氨酸标准曲线 发酵过程中酶活和生物量分析 SDS检测发酵液取样中蛋白表达量 最适反应温度分析 最适反应pH分析 金属离子及EDTA对酶活性的影响 Time Enzyme activity Biomass M 0 8 16 24 32 40 h T/pH 100% Control MgCl2 CaCl2 100% ? ? 100% ? ? 1:福林酚法测定蛋白酶活性 1.1酪氨酸标准曲线 表2 1.2 酶活检测方法 样品测定：取试管3支，编号1,2,3(做2只也可)，每管内加入样品稀释液（pH9.0缓冲液）1mL，置于65℃水浴中预热2min，再各加入经同样预热的2%酪蛋白（pH9.0缓冲液配制） 1mL，精确保温10min，时间到后，立即再各加入0.4mol三氯乙酸2mL，以终止反应，继续置于水浴中保温20min，使残余蛋白质沉淀后离心或过滤。然后另取试管3支，编号l, 2, 3，每管内加入滤液1mL，再加0.4mol