中国药典微生物检验讲义.ppt

菌数报告规则 2、薄膜过滤法：计数方法同平皿计数法，每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。菌数报告规则以相当于 1g、1ml或10cm供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以﹤1报告菌数（每张滤膜过滤1g、1ml或10cm 供试品），或﹤1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 3、MPN法：记录每一稀释级微生物生长的管数，从表3查对每1g或1ml供试品中需氧菌总数的最可能数。 计数要求 需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数(包括真菌菌落数)；霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的总菌落数(包括细菌菌落数)。 若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素(如氯霉素、庆大霉素)的沙氏葡萄糖琼脂培养基或选择性培养基(如玫瑰红钠琼脂培养基)进行霉菌和酵母菌总数测定。使用选择性培养基时，应进行培养基适用性检查。 若采用 MPN 法，测定结果为需氧菌总数。 计数标准 参考欧、美药典，增加菌落计数标准规定结果以10ncfu表示时，限度标准解释如下： “101CFU：最大可接受限值=20； 102CFU：最大可接受限值=200； 103CFU：最大可接受限值=2000。 若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检查结果均符合各品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合各品种项下的规定，判供试品不符合规定。 计数标准 例如，当标准为101cfu，不同于以往10cfu规定。以 10的指数规定标准，考虑了微生物计数结果的可变 性，即计数结果非类似化学检验结果。故要求我们需 要在结果判断时或制定内控标准时，对于结果的判断 或历史数据的分析需要用风险分析的手段进行评估。 制定标准时需要依据历史数据、工艺过程、用药人群 等进行相应分析，制定合理的内控标准，即总原则为 在内控标准的控制下产品无任何质量风险。  总结：检验程序 1、培养基适用性检查； 2、方法适用试验前评估； 3、通过评估，采用规定的稀释液制备样品 4、试验组、菌液对照组、供试品对照组、中和剂或灭活剂对照组（需要的话）制备；培养、观察、计数；计算回收率； 5、判断回收率结果是否满足要求： ⑴是，方法适用性试验通过，进行确认； ⑵否，重新选择方法进行适用性试验。 6、按通过的方法进行样品检验。 2015控制菌检查主要变化—培养体系 增菌培养基（广谱增菌培养基替代选择性增菌培养基）、预增菌、选择性增菌、分离用培养基种类变化；培养时间与温度变化。 培养基的适用性发生变化。 方法适用性发生变化（方法适用性）。 强抑菌性样品的处理方式发生变化。 耐胆盐革兰阴性菌 耐胆盐革兰阴性菌(Bile-Tolerant Gram-Negative Bacteria)替代2010年版大肠菌群Coliform） 耐胆盐革兰阴性菌为一群无严格定义的微生物，通常它们被定义为能够在紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基上生长的微生物。它们包括无乳糖发酵但能够利用葡萄糖，能够在胆盐中生长的革兰阴性菌，例如，肠杆菌科、假单胞菌和气单胞菌属的一些胆盐耐受的革兰阴性菌。 控制菌检查方法适用性结果判断方式 Ch.P2015：如果经过试验确证供试品对试验菌的抗菌作用无法消除，可认为受抑制的微生物不易存在于该供试品中，选择抑菌成份消除相对彻底的方法进行供试品的检查。（阳性对照可以不生长） 非无菌药品微生物限度标准(通则1107)解析 修订思路 （1）将《中国药典》2010版一、二、三部微生物限度标准项目进行对比、整合。 采用一部的限度标准项目作为合并后限度标准的基础。 参考EP7.0、USP35、JPⅩⅤ标准，修订中国 药典的微生物限度标准。 采用清晰直观的表格形式，按给药途径、分液体、固体性状、列出各类药品的限度标准。 与欧洲药典8.0、美国药典36版和日本药局方ⅩⅤ比较，修订中国药典的微生物限度标准。 修订菌数标准表述方式：指数形式10n，最大可接受限度值遵守2倍规则： 101CFU：最大可接受限度为20； 102CFU：最大可接受限度为200； 依此类推。 修订检查项目： “需氧菌总数（TAMC）”替代“细菌数” “耐胆盐革兰阴性菌”替代“大肠菌群” 2015版限度标准的制定特点及总体结构 增订检查制剂类型：基于药品的给药途径及对患者的潜在危 害划分风险等级来制定标准。 齿龈、皮肤制剂、呼吸道制剂； 增加原辅料、中药提取物、中药饮片的控制 兼顾国产药品的特点，保留中国药典对中药制剂分类特点： 是否含药材原粉，是否含