叶绿体分离与荧光染色观察.docxVIP

山东大学实验报告 2014年 04 月 22 日 姓名 系年级 组别 同组者 科目 细胞生物学实验 题目 叶绿体分离与荧光染色观察 学号 PAGE 1 叶绿体分离与荧光染色观察 实验目的 1．通过植物细胞叶绿体的分离与纯化，了解细胞器分离与纯化的原理和方法。 2．熟悉荧光显微镜的使用方法，观察叶绿体的自发荧光和次生荧光。 实验原理 1．叶绿体分离的原理 匀浆破碎细胞，利用差速离心方法分离等渗介质中的悬浮颗粒，收集类叶绿体大小的颗粒，得到叶绿体。 差速离心：颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和颗粒大小不同的颗粒其沉降速率不同。 依次增加离心力和离心时间，就能使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。 叶绿体的分离应在等渗溶液（0.35mol/L的氯化钠或0.4mol/L的蔗糖溶液）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。分离过程最好在0-5℃的条件下进行，如果在室温下，要迅速分离和观察。 2．差速离心 特点：介质密度均一，速度由高