2011分子生物学第四章1.pptVIP

α因子： ★ 促使RNApol与DNA 模板链结合 ★ 位于前端的α因子使双链解链为单链 ★ 位于尾端的α因子使单链新聚合为双链 ★ 核心酶的组建因子 α+α → 2α+β → +β’ ★ α Arg-COOH R-PP(ADP)-R-PP …(40) ADP-核糖基化 ADP核糖基聚合酶 降低与promoter的特异结合力 β因子： ★ 促进RNA pol + NTP → RNA elongation ★ 完成 NMP之间的磷酸脂键的连接 ★ Editing ★ 与 Rho(ρ)因子竞争RNA 3’-end ★ 构成Holo Enzyme后，β因子含有 两个位点 I site (Rif S) ; E site (Rif R) ; 要求高浓度的ATP or GTP 专一性地结合ATP or GTP 对 NTP 非专一性结合 Rifampin是RNA合成起始的抑制剂 β’ 因子： ★ 强碱性亚基 ★ 促使RNA pol与非模板链（sense strand）强结合 ★ 受K酶抑制 Holo Enzyme 含有五个功能位点 sense strand DNA binding point(β’ ) DNA/RNA hybrid site（形成磷酸二酯 键） (β) D. S.DNA unwinding point(α) D. S.DNA rewinding point(α) δfactor point 原核生物RNApol (Core) 的结构与功能 Enzyme Movement DNA coding strand (β’ ) Rewinding point (α) Unwinding point (α) RNA binding site RNA/DNA hybrid (β) DNA template strand 10-17bp 原核生物RNApol (Core) 的结构与功能 Enzyme Movement RNA binding site RNA/DNA hybrid (β) I E E site (Rif R) ; 非专一性结合 NTP I site (Rif S) ; 专一性地结合ATP/GTP Purification of the individual subunits of E.coli RNA polymerase in Urea electrophoresis buffer (Alfred heil Ziling 1970) Separation and reconstitution of RNA polymerase to locate the determination of Rifampin resistance The reconstituted RNA polymerase was Rif S , regardless of the origin of the other subunits The βsubunit is obviously the determinant of Rifampin sensitivity or resistance Recombination the α+α+ δ+ β’ from Rif R E. coli with β from Rif R E. coli the α+α+ δ+ β’ from Rif R E. coli with β from Rif S E. coli 基因的表达 Gene expression 第4章 RNA转录 (RNA transcription) 4.1 ?基本概念 4.2 原核生物RNA转录启动子 4.3 真核生物RNA转录启动子 4.4 Transcription Elongation 4.5 Transcription termination 4.6 Anti-termination in Rho-dependent terminator of Prokaryotes 4.7 Pre-RNA processing in Eukaryotes 4.1?