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五 六、总氮量的测定 -- 凯氏定氮法 一、目的 学习凯氏定氮法的原理和操作技术。 二、实验原理 蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。这些元素在蛋白质中含量都有一定 比例关系，其中含碳 50～55%、氢 6～8%、氧20～23%、氮 15～17%和硫 0.3～2.5%。 此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。 由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征， 而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相 当接近，一般恒定在 15～17%，平均值为 16%左右，因此在蛋白质的定量分析中，每 测得1 克氮就相当于 6.25 克蛋白质。所以只要测定出生物样品中的含氮量， 再乘以 6.25 ， 就可以计算出样品中的蛋白质含量。 蛋白质 总氮量的测定， 通常采用微量凯氏定氮法。 凯氏定氮法由于具有测定准确度 高，可测定各种不同形态样品等两大优点，因而被公认为是测定食品、饲料、种子、生 物制品、药品中蛋白质含量的标准分析方法。其原理如下： 有机物与浓硫酸供热， 使有机氮全部转化为无机氮 —— 硫酸铵。 为加快反应，添加 硫酸铜 和硫酸钾 的混合物； 前者为催化剂，后者可提高硫酸沸点 。这一步约需 30min 至 1h 或更长时间，视样品的性质而定。 CH2NH 2COOH + 3H 2SO4 → 2CO2 + 3SO2 + 4H 2O + NH 3 消化反应方程式： 2NH 3 + H2