王大亨酶工程报告3.docVIP

酶工程第三次报告 生物技术091 王大亨 2009016255 蛋白质分离纯化的一般程序 酶原材料的选择 在提取某一种酶时，首先应当根据需要，选择含此酶最丰富的材料，如胰脏是提取胰 蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、淀粉酶和脂酶的好材料。由于从动物内脏或植物果实中提取酶制剂受到原料的限制，如不能综合利用，成本又很大。目前工业上大多采用培养微生物的方法来获得大量的酶制剂。 1.2材料的预处理及细胞破碎 分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。 1.3蛋白质的抽提 通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂（十二烷基磺酸钠、tritonX-100 等），使膜结构破坏，利于蛋白质与膜 分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。 1.4蛋白质粗制品的获得 选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来，比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。 1.5样品的进一步分离纯化 用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质，须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。 二、SOD的提取分离及纯化所采