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HIV抗体检测标准操作程序 天津市卫生防病中心 夏建晖 《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版）共10章 HIV抗体检测标准操作程序 检测程序： 生物安全： 试验操作： 室内质控： HIV抗体检测程序:初筛-复检-确认 复检： 对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂 和另外一种不同原理或不同厂家的筛 查试剂重复检测。如两种试剂复测均 呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性； 如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送 艾滋病确认实验室进行确认。 HIV抗体检测程序:初筛-复检-确认 HIV抗体检测程序:现象一 ? 出现HIV抗体筛查阳性时，有的实验室仅是通知受检者到确认实验室采血检测，不向确认实验室送原血样和HIV抗体复检化验单。这样是不符合要求的。 筛查阳性时，必须将原血样和HIV抗体复检化验单送确认实验室。最好是在送样单上注明联系电话，以便及时反馈结果。 HIV抗体检测程序:现象二 出现HIV抗体筛查阳性时，有的单位过度重视，在没得到确认结果时，将受检者作为HIV感染者对待，造成不必要的恐慌。 天津目前一般人群的HIV感染率在万分之一左右 ，尚属于低发区。 在术前、产前筛查中会出现许多筛查阳性、经确认为阴性的情况。 出现HIV抗体筛查阳性时，实验室没有必要扩大知情范围，及时送检。 缩小知情范围，可能有助于减少恐慌。 HIV感染者，与乙肝感染者的消毒处理措施没有什么差别。 〔就传染性而言，乙肝病毒更为凶险〕 ? 生物安全 《实验室生物安全通用要求》国家标准已正式发布， 并于2004年10月1日正式实施。 规定了实验室生物安全管理和实验室的建设原则 同时还规定了生物安全分级、 实验室设施设备的配置、 个人防护和实验室安全行为等方面内容。 该标准解决了实验室安全管理存在的隐患。 ? 生物安全 《全国艾滋病检测技术规范》 第二章[HIV抗体检测]中提出 “HIV抗体检测实验室应符合《实验室生物安全通用要求》对II级生物安全实验室（BSL-2）的各项要求。” 第七章[艾滋病实验室安全防护和职业暴露预防]中进一步指出 “艾滋病血清学检测（包括筛查和确认实验室）、免疫学和核酸检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。” ? 生物安全 Ⅱ级生物安全实验室，是对临床实验室的普遍要求， 是临床实验室发展的方向。 一份未知样品，无论检测项目如何，都具有相同的潜在传染性。安全投入不足，将成为今后临床实验室的重要隐患 生物安全 生物安全 生物安全 Ⅱ级生物安全实验室设施和设备要求 (《实验室生物安全通用要求》) 生物安全 生物安全柜(避免的危害：气溶胶和喷溅)  生物安全 生物安全 生物安全 生物安全 生物安全 生物安全 生物安全 实验操作中的生物安全注意事项： HIV抗体检测技术要求 建立标准操作程序 禁止肉眼判读！ 保证酶标仪，洗板机正常运转 保证加样器准确 选择高质量的与加样器配套的TIP头 使用有效期内的试剂 保证样品质量 酶联免疫吸附试验（ELISA） ELISA是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做半定量分析等优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。ELISA的影响因素较多，加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。 HIV抗体检测中常规使用ELISA试验 酶联免疫吸附试验（ELISA） 1971年Engvall等人把免疫组化的EIA技术应用于临床检验发展为ELISA技术，酶联免疫吸附剂试验。 特点 ： 在聚苯乙烯固相载体表面组装免疫活性物质形成“免疫吸附剂” 酶标记免疫活性物质，化学显色剂进行信号放大 ELISA试验结果判断 在进行ELISA试验时，要严格按照试剂盒说明书操作。按照说明书中的方法，计算临界值（Cutoff值）。 样品OD值≥临界值 阳性 样品OD值 临界值 阴性 注意事项 保证实验室温度，室温过低有可能造成吸光度值偏低。 ELISA试验的敏感性很高，如果操作不当很容