植物细胞工程实验.docVIP

PAGE 12 PAGE 1 植物细胞工程 实 验 报 告 班级： 姓名： 学号： 指导老师： 时间： 目录 实验准备：①培养基母液的配制 ②培养基的配制与灭菌 实验一、香蕉吸芽的组织培养 实验二、烟草叶片的组织培养 实验三、木薯的微繁技术 实验四、桉树再生体系建立 实验五、玉米花生成熟胚培养 实验六、柱花草叶片组织培养 实验七、水稻盾片组织培养 自选实验：洋葱、仙人掌的组织培养 实验准备：①培养基母液的配制 一、实验目的 掌握培养基母液的配制。在配置培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液。 二、实验原理 培养基是植物细胞、组织和器官吸取营养的场所。在植物细胞的分裂和分化过程中，需要各种营养物质，这些营养物质包括无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质等。在对植物的器官、组织和细胞进行离体培养时，只是切取植物体的一小部分，它们无法象整体植株那样合成生长发育所需的全部物质。而自然界的植物千差万别，每一种植物都有自己独特的生理代谢过程和各自的营养需求，没有哪一种培养基能够适用于所有植物。因此，对培养基组成成分的筛选是非常重要和必不可少的程序。 目前对植物进行组培时，人们所使用的培养基只几十种，其中MS培养基应用最为广泛。说明MS培养基的无机盐成分对许多植物种均是适宜的，它的无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也较高。 三、实验试剂与仪器设备 1、药品试剂： 母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2，4-D等。 2、仪器设备： 电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。 四、实验内容 （一）母液的配制 MS培养基母液方案配制如下表： 成 分 1L母液的用量(mg/L) 每升培养基取用量(ml) 备 注 大量元素(20X) NH4NO3 33000 50 KNO3 38000 KH2PO4 3400 MgSO4﹒7H2O 7400 CaCl2 6600 50 单独配制 铁盐(100X) FeSO4.7H2O 2780 10 Na2-EDTA 3730 微量元素（200X） KI 166 5 H3BO3 1240 MnSO4.H2O 3380 ZnSO4.7H2O 1720 Na2MoO4.2H2O 50 CuSO4.5H2O 5 CoCL2.6H2O 5 有机元素(100X) VB1 10 10 VB6 50 烟酸 50 甘氨酸 200 肌酸 10000 具体配制步骤如下： 1、大量元素母液的配制 无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入30-40mL重蒸馏水，置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高，60-70℃)。溶解后，在1000mL量筒中，混合后用重蒸馏水定容到1000mL。其中CaCl2单独配制。在加入母液时CaCl2应最后加入，以免形成沉淀。将配好的混合液倒入细口瓶中，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，配1000mL培养基取此母液50mL。 2、微量元素母液的配制 无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用量的200倍，用微量0.0001g的电光分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解。混合定容于100ml容量瓶中保存于冰箱中,配制培养基时，每配制1000mL培养基取此母液5mL. 3、铁盐母液的配制 无机盐中铁盐母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。 4、有机元素的配制 无机盐中有机元素母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。 五、注意事项 1、配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。 2、配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。 3、药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。 4、药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。 5、一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素 氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。 5、母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。 实验准备