我们实验室木本果树RNA提取方法.doc

RNA提取 RNA提取试剂： DEPC水：0.1%的DEPC加入双蒸水，在37℃培养箱过夜，灭菌121℃，40min。 CTAB RNA提取液：20gCTAB，20gPVP(K30),100ml 1M Tris(pH8.0), 50ml 0.5M EDTA(pH8.0), 116.88g NaCl, 0.5g 亚精胺，溶解在DEPC水后灭菌（121℃，15min）. SSTE: 1M NaCl, 0.5%SDS, 10mM Tris，1mM EDTA ，pH8.0; 即5.58g NaCl , 0.5g SDS , 1ml 1M Tris , 0.2ml 0.5M EDTA, pH8.0, 100ml. 12M LiCl: 144.98g LiCl溶于水，定容至200ml. 提取RNA步骤： 准备10ml离心管，121℃灭菌20min，在烘箱烘5h，将管子烘干备用； 用锡纸包好研钵、研棒和勺子，200℃烘箱烘上4-6h，取出烘好的研钵等晾冷； 开水浴锅65℃，将CTAB提取液放在65℃水浴锅加热； 拿出10ml离心管，每管加4mlCTAB溶液，加80微升巯基乙醇（2%），写上编号，每个样品两管提取液； 加好的样品放在65℃加热，拿出研钵开始准备磨样； 磨好的样品每管加入约1g, 在漩涡仪上混匀（可以久一点）； 一组样品磨好后，再漩涡一次，在65℃水浴锅中放置5min; 每管加入