发色基团辅助激光失活技术的研究方法及其应用进展.PDFVIP

中国科学: 生命科学 2014 年 第44 卷 第4 期: 364 ~ 370 SCIENTIA SINICA Vitae SCIENCE CHINA PRESS 评 述 中国知名大学及研究院所专栏 浙江大学专辑 发色基团辅助激光失活技术的研究方法 及其应用进展 ① ② ①* 豆敏华 , 张家瑜 , 周天华 ① 浙江大学医学院细胞生物学系, 杭州 310058; ② 温州医科大学, 温州 325035 * 联系人, E-mail: tzhou@ 收稿日期: 2014-02-10; 收稿日期: 2014-03-13 国家自然科学基金重大项目(批准号:、国家自然科学基金(批准号:和国家重大科学研究计划(批准号: 2012CB945004, 2013CB945603)资助 doi: 10.1360/052014-50 摘要 发色基团辅助激光失活(CALI)技术通过目标蛋白与能够吸收光能量继而产 关键词 生大量氧自由基的荧光基团相结合, 以干扰目标蛋白的功能. 该技术始于 20 世纪 80 发色基团辅助激光失活 活性态氧 年代, 目前已经发展出很多新的方法, 对许多生命科学领域的研究起到了重要的推动 光漂白 作用. 本文结合国内外最新的研究进展, 针对CALI 的作用原理、技术方法和实际运用 等方面进行简要综述, 并展望其在临床上的潜在应用价值. 后基因组时代的最大挑战之一是如何在活体细 制的技术. 目前, 发色基团辅助激光失活(chromo- 胞内准确地研究目标蛋白的功能. 目前, 一般的方法 phore-assisted laser inactivation, CALI)技术[1~4]可在高 是运用基因敲除(gene knockout)或 RNA 干扰(RNAi) 时间与空间分辨率的基础上干扰目标蛋白的功能, 等技术, 即通过功能缺失(loss of function) 的方法产 从而较好地避免了上述的一些问题, 具有良好的应 生细胞表型, 来探索蛋白的功能. 但是, 上述技术存 用前景. 在时间上的延迟, 可能在细胞内导致难以检测和控 制的功能代偿现象, 从而干扰了研究结果的准确性. 1 CALI 技术的简介 另外, 一些科学家通过小分子化合物抑制剂来研究 目标蛋白的在体功能. 然而, 由于小分子化合物存在 1.1 CALI 技术的基本原理 亚细胞空间定位差、难以透过细胞膜等诸多问题, 也 CALI 技术可通过抗体偶联的小分子发色基团或 妨碍了其广泛应用. 同时, 目前许多商品化的小分子 者在细胞内融合表达荧光蛋白, 与目标蛋白结合, 然 抑制剂还存在价格比较昂贵和细胞毒性强等缺陷. 后激光照射发色基团使其吸收能量, 继而产生大量 因此, 亟需找到一种能方便、快捷地在细胞内特定区 的氧自由基(reactive oxygen species, ROS)[5,6], 包括 域灭活目标蛋白, 并在时间和空间上都能被精确控 单线态氧(singlet oxygen) 和氢氧根离子(hydroxyl 引用格式: 豆敏华, 张家瑜, 周天华. 发色基团辅助激光失活技术的研究方法及其应用进展. 中国科