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临床输血学实验指导 实验一 血型鉴定 目的要求 : 掌握 ABO 血型的鉴定 熟悉 Rh 血型的鉴定 一、 ABO 血型鉴定 1. 凡红细胞上具有 A 抗原者为 A 型 ; 有 B 抗原者为 B 型 ;A 和 B 抗原都没有者为 O 型 ;A 和 B 抗原都有者为 AB 型。 2.ABO 血型检查法 : 将被检者红细胞用生理盐水洗涤 1-2 次 , 配成 2-5% 悬液待用。 正定型 : 取小试管二只 , 分别用记号笔标记后加抗 A 、抗 B 血清各一滴 , 然后各加受检者红细胞悬液一滴。 (2) 反定型 : 取小试管三只 , 分别用记号笔标记后加受检者血清一漓 , 然后加标准 A 、 B 及O 型红细胞各一漓。 将上述混匀后 , 静置数分钟 , 或 3 ∞ 0 转 /min 离心 15 秒后 , 肉眼判断凝集度。 结果判断 : 抗A血清 抗B血清 A细胞 B细胞 O细胞 血 型 + - - + - A - + + - - B - - + + - O + + - - - AB 二、阳血型鉴定 1.Rh 血型系是目前为止所发现的红细胞血型系中最为复杂的一个血型系。至今已发现的抗原 40 多个 , 但涉及临床问题的主要是 5 个抗原 , 即 C 、 c 、 D 、 E 、 e 及其相应的特异性抗体。 目前输血界普遍认为凡带有 D 抗原者 , 称为阳阳性 , 不带 D 抗原者称为 Rh 阴性。但是从输血免疫及血型血清学角度来看 , 只有 cedee 才是真正的 Rh 阴性者。 2.m 血型检查法 一般情况下 ,Rh 血型鉴定中只进行 Rh(D) 定型。遇有特殊情况时才进行 Rh 血型系中 5 个抗原的定型。现售的 Rh(D) 抗血清大多为单克隆 IgM 型或 IgMdgG 型。 方法 : 取小试管 1 支 , 用笔标记好后 , 加入 mI 抗 D 血清 1 滴 , 若为单克隆的 IgM 型或 IgMdgG 抗血清 , 加 2%-5% 受检者红细胞盐水悬液 1 漓 , 混匀 ,3000r/min 离心 15 秒 , 肉眼观察凝集度。若为 IgG 型血清 , 需加做 2% 受检者红细胞及菠萝酶液各 1 滴 , 混匀 , 置 37 ℃水浴 30 分钟 , 30 ∞ r/min 离心 15 秒 , 肉眼观察凝集度。同时做阴、阳对照。 结果判断 : 阳性对照管凝集 ; 阴性对照管不凝集时 , 受检管凝集即表示受检红细胞含有相应抗原 , 不凝集则表示不含有相应抗原。 3.RhD 阴性确认试验 取 3 支试管做号标记 , 加三个批号单克隆 IgG 型抗 D 血清一滴 , 再加 2%-5% 受检者 RBC悬液 1 漓 ,37 ℃水浴 3Omin, 用生理盐水洗涤三次 , 加多价抗人球蛋白 1 滴 ,3000r/min 离心 15 秒 , 肉眼观察凝集度 , 若都不凝 , 为 Rho(D) 阴性 , 若有一试管内出现凝集 , 为 DU 型 , 或 Rho(D) 缺失型。 实验二交叉自己血试验 目的要求 : 掌握交叉配血试验的原理 熟悉交叉配血试验的操作 一、交叉配血试验的原理及临床意义 : 交叉配血试验也称配合性试验 , 其目的是保证安全输血。此试验是检查不配合性 , 使献血员 与受血者 ( 病人 ) 的血液间没有可测的不相配合的抗原 -抗体成分。配血试验阴性 , 输血后患 者的血清不会与献血员的红细胞发生反应。即使已知患者和献血员的 ABO 及阳 1D 血型相同 , 配 合性试验也是必要的。因为除了 ABO 、 Rh(D) 外还有其他红细胞血型系统存在。尽管患者的 ABO 、 Rh 血型与献血员配合 , 仍有可能含有其他红细胞血型的抗体 , 受血者仍有可能与献血员 的之间发生严重输血反应。 1. 交叉配血试验通常包括 : (1) 受血者血清对供血者红细胞的主侧配血。 (2) 受血者的红细胞对供血者血清的次侧配血。 (3) 受血者的红细胞对受血者血清为自身对照。 交叉配血试验主要有三种方法 : (1) 盐水介质交叉配血。 (2) 酶介质交叉配血。 (3) 抗球蛋白介质交叉配血。 2. 交叉配血试验的操作 主侧 : 取受血者血清 1-2 滴 + 供血员 2-5% 红细胞盐水悬液 1 滴 次侧 : 取受血者 2-5% 红细胞盐水悬液 1 滴 + 供血员血清 1-2 滴 (1) 盐水介质交叉配血 方法 : 主、次侧试管各离心 3 ∞ o 转 /min 、 15 秒 , 观察结果。 意义 : 只能检出如 ABO 、 MN 、 hwis 等 IgM 抗体 (2) 酶介质交叉配血。 原理 : 蛋白酶能破坏红细胞表面的唾液酸 , 降低表面电荷 , 使红 细胞间距离缩短。 方法 : 主、次侧试管中各加 0.5% 菠萝