叶片碳代谢相关物质和酶试验方法-棉花.docxVIP

叶片SuSy、SPS、酸性Inv、FBPase、Rubisco活性测定方法 eq \o\ac(○,1)SuSy/SPS 鲜样：0.3g 提取液： Hepes-NaOH pH7.5 50mM 5ml MgCl2 10mM EDTA 1mM EGTA 1mM PMSF (苯甲基磺酰氟) 1mM PVP 2%(w/v) Triton X-100 1%(v/v) BSA 0.5(w/v) 冰浴碾磨，20000g、4℃离心10min，收集上清液即实验粗酶液 反应液： Hepes-NaOH pH7.5 50mM 350μl UDPG 15mM D-果糖/6-磷酸果糖 15mM MgCl2 10mM 粗酶液： 200μl 30℃水浴，反应30min；沸水浴1min，终止反应 蔗糖含量测定： NaOH 2M 0.1ml 沸水浴10min，冷却 HCl 30% 3.5ml 间苯二酚（用95%乙醇溶解） 0.1% 1ml 摇匀，80℃水浴10min，摇匀，480nm比色 用蔗糖配制0-120μg/ml梯度溶液，绘制蔗糖标准曲线，酶活力以mg Sucrose gFW-1 h-1计。 eq \o\ac(○,2)SuSy分解方向 粗酶液提取同① 反应液： Pipes-KOH pH6.5 20mM 450μl UDP 2mM 蔗糖 100mM 粗酶液： 200μl 30℃水浴，反应30min 终止反应