植物组织DNA高通量自动化提取－磁珠法.pdf

植物组织DNA 高通量自动化提取－磁珠法 一、 样品前处理 （1） 取新鲜植物样品0.2 和或干燥植物样品0.1 克，装入1.5 ml 或2 ml 的离心 管中，同时加入3~6 颗瓷珠，液氮冻透后，转移至冷冻研磨仪（MM400 ） 高速匀浆2~3 分钟。若需要得到完整的DNA 分子，使用手工液氮研磨材 料 （2 ） 加0.54 ml Buffer SPL 至样品管中，涡旋振荡60 秒后65℃水浴15 分钟 （3 ） 加0.18 ml Buffer PS 至上述样品管中，涡旋振荡60 秒后冰上放置20 分钟 （4 ） 室温下4000～5000 g 离心20 分钟 （5 ） 取400 µl 上清液转移至2 ml 96 深孔板中（以下利用自动化磁珠提取纯化 系统提取DNA ） 二、 自动化磁珠提取纯化系统提取DNA 程序编写 （1） 双击桌面“VERSAware 10 ”图标，打开仪器控制软件，出现软件主界面 （2 ） 点击“New Assay ”新建运行程序，出现“VERSAware 10 ”对话框，给程 序命名。默认名称为Assay created on 日期＋时间，也可按照实验者意愿 进行命名。点击“OK ”，在软件左侧以下顶端出现新建的程序名称 （3 ） 鼠标选中新建的程序名称。首先设置试剂、样品、枪头放置的位置。一般 1 号工作盘位放置TIP BOX （规格为TIP BOX （8 ），200 µl ）。方法：鼠标 选中右侧“TIP BOX ”图标，出现各种规格的Tips ，选中该规格Tip 的图 标，按下左键不放，直接将其拖至1 号工作盘位位置。2 号工作盘位放置 TIP BOX （规格TIP BOX （8 ），1000 µl ），设置方法同前面。3 号工作盘 位放置Standard Plates （规格96 PCR1，收集提取好的DNA 样品），设置 方法同前面。4 号工作盘位放置Standard Plates （96 深孔板，规格96 DEEP 1）。5 号工作盘位放置Reservoir （试剂槽，共有8 个槽放置不同类型和体 积大小的试剂）。6 号工作盘位空置，提取DNA 过程中96 深孔板转移放 置在该位置。 （4 ） 点击“Advanced NAP ”，在该界面下设置Sample 和Collection 位置。Sample 选择4 ，表示4 号工作盘位放置样品。Collection 选择位置3，表示3 号工 作盘位放置 96 孔板收集提取好的 DNA 样品。同时设置反应孔，若提取 96 个样品，则Sample4 和Collection6 中所有孔全部选中，两个孔板选中 孔的数量必须一一对应 （5 ） 点击“New sequence ”图标，添加实验步骤，出现对话框，在框中填写实 验名称。第一步为添加磁珠，实验名称可填写为“add MagPure Particles ”。 在Options 里面，Reagent Position 选择工作盘位5 。Tip Box for Reagent Addition 选择工作盘位2 。Tip Box for Waste Liquid Removal 选择工作盘位 1。Shaker ﹟1 Position 选择工作盘位6 。Shaker ﹟2 Position 选择工作盘 位6 。Plate Cooler Position 选择工作盘位6 。Cooler temperature 手动填写 冷却温度 （6 ） 在NAP Process 里面需要填写以下项目：Reagent Name 里面填写试剂名称， MagPure Particles ，旁边小方框勾选上“√”号；Reagent Source 选择A5 ， 表示试剂槽A5 位置放置磁珠；Volume 手动填写数字30 ；Well to Well 前 的小方框勾选上“√”号 （7 ） 点击“New sequence ”，添加第2 个实验流程，填写实验名称为add GDP 。 主要步骤包括：向工作盘位4 上的96