植物组织培养技术专题讲座课件.ppt

定义：利用植物体细胞杂交技术并结合常规育种培育出抗病虫品种的育种方法。 植物体细胞杂交：指将植物不同种、属或科间的体细胞原生质体通过人工方法诱导融合形成杂种细胞，然后进行离体培养使其再生成植株的技术。 抗病虫细胞工程育种 抗病虫体细胞杂交育种 育种程序 1. 选择亲本进行体细胞杂交 2. 原生质体的制备 3. 原生质体融合 4. 杂种细胞的筛选与鉴定 5. 杂种细胞的培养与植株再生 抗病虫细胞工程育种 5.结合常规育种培育出抗病虫品种 植物离体培养的理论，源于19世纪30年代德国植物学家Schleiden和动物学家Schwann提出的”细胞学说“，其主要观点：细胞是生物体的基本结构单位，由它构成整个生物个体；同时认为植物细胞又是在生理上、发育上具有潜在的全能性功能单位。Schwann还指出：”每一个细胞应该可以独立生活和发展，假如具有的条件正如它存在于有机体内一样…….“。 1902年德国著名植物学家Haberlandt根据细胞学说，提出高等植物的器官和组织可以不断分割，直至单个细胞的观点，这种单个细胞是具有潜在的全能性功能单位。 培养基(culture medium) ：是植物组织培养的重要基质。在离体培养条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同。因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。 三、培养基的种类、配方及特点 培养基及其配制 1、根据态相不同：固体培养基、液体培养基 2、根据培养物培养过程：初代培养基、继代培养基 3、根据作用不同：诱导培养基、增殖培养基、 生根培养基 4、根据营养水平：基本培养基、完全培养基、 改良培养基。 （一）培养基的种类 培养基及其配制 若只含有大量元素与微量元素和碳水化合物的培养基，称为基本培养基。 在基本培养基的基础上，添加各种各样的生长调节物质和其他有机附加物的培养基叫完全培养基。 初代培养基： 指用来第一次接种外植体的培养基。继代培养基：指用来接种继初代培养之后的培养物的培养基 。 培养基及其配制 母液名称 药品 名称 原配方量 (mg)/ L 大量元素母液 ? NH4NO3 1650 KNO3 1900 CaCl·2H2O 440 MgSO4 ·7H2O 370 KH2PO4 170 微量元素母液 MnSO4·H2O 22.3 ZnSO4·7H2O 8.6 CoCl·6H2O 0.025 CuSO4·5H2O 0.02 H3BO3 6.2 Na2MO4·2H2O 0.25 KI 0.83 铁盐母液 FeSO4·7H2O 28.7 Na2-EDTA 37.3 有机物母液 烟酸(Vpp) 0.5 盐酸吡哆醇 0.5 盐酸硫胺素 0.1 肌醇 100 甘氨酸 2 （二）MS培养基配方 培养基及其配制 1、MS培养基：它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是目前应用最广泛的培养基。 特点：是无机盐离子浓度较高，有高含量的N、K，硝酸盐量大，营养丰富。 （三）常用的培养基及特点 培养基及其配制 2、White培养基：1943年由White为培养番茄根尖而设计的。 特点：无机盐浓度较低，适于生根培养。 3、N6培养基：1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。 特点：是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高，不含钼。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花粉和花药培养。 培养基及其配制 (4)B5培养基:是1968年由Galmborg等为培养大豆根细胞而设计的。 特点：是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。 (5)KM—8P培养基:它是1974年为原生质体培养而设计的。 特点：是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素。 培养基及其配制 四、 培养基的配制 （一）、母液(stock solution)的配制和保存 所谓母液是欲配制液的浓缩液。 意义: ①保证各物质成分的准确性 ②配制时的快速移取 ③便于低温保藏。 一般母液配成比所需浓度高10-100倍。 母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。 培养基及其配制 单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。一般用mg/ml 或mg/L表示。 混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后再混合成母液。 配制生长素类：可先用少量0.1N的NaOH或95%酒精助溶。浓度为：1-5mg／ml。 配制细胞分裂素类：一般先用少量0.5-1N