食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌-公开课件（讲义）.pptVIP

食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌检验 Introduction 产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)又称魏氏梭菌(C．welchii)，为厌氧芽孢杆菌属成员。广泛存在于自然界的水源、土壤及人和动物肠道之中。 条件致病菌，主要引起人的食物中毒、气性坏疽和动物猝死症等疾病。毒性作用较肉毒梭菌和破伤风梭菌要弱， 但产生毒素种类繁多。 Contents 产气荚膜梭菌的生物学性状 产气荚膜梭菌的致病性 产气荚膜梭菌的流行病学 产气荚膜梭菌的检验 产气荚膜梭菌的快速检测方法 产气荚膜梭菌的污染及控制 一、产气荚膜梭菌的生物学性状 1.形态与染色 革兰氏阳性粗大杆菌，专性厌氧。 无鞭毛，体内有明显荚膜。 芽孢椭圆形，不大于菌体，位于次极端。 单独或成双排列，有时也呈短链排列。 产气荚膜梭菌的生物学性状 2.培养特性 生长活跃，代谢迅速。 血琼脂平板：双层溶血环（靶形溶血） 内环完全溶血 外环不完全溶血 含铁牛奶培养基： “汹涌发酵” （stormy fermentation） 产气荚膜梭菌的生物学性状 3.生化特性 能发酵多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖，产酸产气； 不发酵甘露糖或水杨酸。 能液化明胶，产生硫化氢，不能消化已凝固的蛋白质和血清。 二、产气荚膜梭菌的致病性 多种外毒素、肠毒素； 侵袭性酶：卵磷脂酶、纤维蛋白酶、透明质酸酶和胶原酶等。 分成A、B、C、D、E5个毒素型。 A型主要引起气性坏疽和食物中毒。C型则引起坏死性肠炎。 所致疾病 1.气性坏疽 致病条件与破伤风梭菌相同 潜伏期短，发病迅速，病情险恶，死亡率高。以组织坏死、气肿和全身中毒为特征。 2.食物中毒 食入被大量细菌污染的食物（肉类） 临床表现：剧烈腹绞痛、腹泻；可自愈 3.坏死性肠炎 三、产气荚膜梭菌的流行病学 在世界各地出现，但血清型分布不同。 可以引起地区性流行，也有散发性报道。 中毒最常发生于儿童和老人。 多发生在夏、秋季。 四、产气荚膜梭菌的检验 设备和材料 冰箱：0 ℃-4℃。 恒温培养箱：36℃士1℃ 恒温水浴锅：46℃士1℃ 显微镜：10×～100 × 均质器或灭菌乳钵 厌氧培养装置：常温催化除氧式或碱性焦性没石子酸除氧式 灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度），10mL（具0.1mL刻度） 灭菌试管：16mmX160mm 灭菌平皿：直径90mm 灭菌锥形瓶：500mL 产气荚膜梭菌的检验 培养基和试剂 1.疱肉培养基：GB/T4789.28-2003中4.67 2.亚硫酸盐一多粘菌素一磺胺嘧啶琼脂(SPS) ： GB/T4789.28--2003中4.69 3.液体硫乙醇酸盐培养基(FT) ： GB/T4789.28-2003中4.70 4.动力一硝酸盐培养基：GB/T4789.28-2003中4.72 5.含铁牛奶培养基：GB/T4789.28-2003中4.71 6.卵黄琼脂培养基：GB/T4789.28-2003中4.68 7. 0.1％蛋白陈水：GB/T4789.28-2003中4.85 8.硝酸盐还原试剂：GB/T4789.28-2003中3.17 9.革兰氏染色液：GB/T4789.28-2003中2.2 产气荚膜梭菌的检验 活菌计数培养检验程序 产气荚膜梭菌的检验 确证试验检验程序 确证实验 1.革兰氏染色镜检：产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗大杆菌，其耐热株可能形成卵形芽孢，位于菌体中央或近末端，其宽度一般不大于菌体。 2.动力-硝酸盐还原实验 用接种环（针）穿刺接种动力一硝酸盐培养基，于36℃士1℃培养24h，观察接种线的生长情况，判断有无动力。然后，滴加甲萘胺液和对氨基苯磺酸液各0.5mL，观察硝酸盐是否被还原。产气荚膜梭菌无动力，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。 确证实验 3.取生长旺盛的FT培养液1mL接种于含铁牛乳培养基，46℃水浴中培养2h，观察有无“暴烈发酵”现象，5h内不发酵者为阴性。产气荚膜梭菌发酵乳糖，凝固酪蛋白并大量产气，呈“暴烈发酵”现象，但培养基不变黑。 4.用接种环取FT培养液点种于卵黄琼脂平板（每张平板至少可接种10点），于36℃士1℃厌氧培养24h，观察接种点的变化。产气英膜梭菌产生卵磷脂酶，分解卵黄中的卵磷脂，接种点的底部及周围形成乳白色的混浊带。 产气荚膜梭菌的检验 菌数计算 根据黑色菌落的计数和确证试验的结果，计算每克（毫升）食品检样的含菌数。 例如：10-4稀释液的平板长有黑色菌落100个，而供做确证试验的10个菌落中有7个被确证为产气荚膜梭菌，则每克（毫升）食