药学分子生物学实验1.pptVIP

- + 琼脂糖凝胶电泳 样品 加上样缓冲液(示踪指示剂) ，加SYBR green I （荧光染料），混匀； 上样缓冲液包含二甲苯青（相应于2KbpDNA）和溴酚蓝（相应于20bpDNA）两种染料 荧光染色原理 核酸的荧光染料如溴化乙锭（EB)、SYBR Green I等嵌入碱基平面后，本身无荧光的核酸在 UV 激发下发出荧光。 荧光强度的积分与溶液中核酸的含量呈正比（SYBR Green I具有双链DNA的专一选择性；EB则与单链、双链甚至三链DNA均可高效结合）。 SYBR Green I 工作原理 SYBR GreenI 能结合到双链DNA的小沟部位 紫外灯下发出荧光 SYBR Green 紫外投射分析仪 实验3.3 琼脂糖凝胶电泳鉴定 质粒DNA及酶切产物 琼脂糖凝胶电泳操作步骤 样品： 质粒DNA 10μl;酶切产物 10μl； 分别加上样缓冲液2μl，加SYGR green I 2μl，混匀； 取10μl加入加样孔中； 110V稳压，电泳至凝胶2/3处； 紫外灯下观察结果（与DNA Marker比较）； 记录并画出示意图。 重组质粒DNA 目的基因 GAPDH（205bp） 质粒载体2692bp 重组质粒载体2897bp A＋ Pvu II: CAGCTG GTCGAC 535bp 2362bp 限制酶切产物分析 1 2