第3节：蛋白质的分离与纯化(1).pptVIP

知道了沉降系数S，可根据斯维得贝格 〔Svedberg〕方程计算蛋白质分子的相对分子质量： M=RST/D〔1－iρ〕 R：气体常数 T：绝对温度 D：扩散系数 ρ：溶剂的密度 3、凝胶过滤法 凝胶过滤所用介质为凝胶珠，其内部为多孔网状结构。 一定型号的凝胶网孔大小一定，只允许相应大小的分子进入凝胶颗粒内部，大分子则被排阻在外。 洗脱时大分子随洗脱液从颗粒间隙流下来，洗脱液体积小；小分子在颗粒网状结构中穿来穿去，历程长，后洗脱下来，洗脱体积大。 测定蛋白质分子量一般用葡聚糖，商品名：Sephadex 洗脱体积：自加入样品开始到该组分的洗脱峰峰顶（即收集液中该组分浓度最大时）出现时所流出的洗脱液体积。 测定样品蛋白质分子量的方法： ① 测得几种标准蛋白质的洗脱体积〔Ve〕； ② 以相对分子质量对数（logM）对Ve作图，得标准曲线； ③ 再测出未知样品洗脱体积〔Ve〕； ④ 从标准曲线上可查出样品蛋白质的相对分子质量。 4、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 聚丙烯酰胺凝胶：单体—丙烯酰胺（acrylamide,简称Acr）和交联剂—N,N-甲叉双丙烯酰胺（methylene-bisacrylamide,简称Bis）在加速