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1 不同类型铅中毒大鼠模型的神经系统毒性学习记忆障碍机制比较研究 摘要 大量的流行病学调查和研究表明铅中毒可诱发肾脏、神经系统、造血系统损伤特别是对脑发育的影响备受关注大家公认为发育大脑更容易受到铅的损害国内外有许多关于铅中毒对脑发育影响机制研究但其物质基础如何仍未完全明确。铅中毒对成熟大脑影响的报道相对较少有关铅中毒对发育大脑和成熟大脑影响的机制差异并没有系统报道。本次实验采用幼年和成年的大鼠以腹腔注射和自由饮用醋酸铅溶液的方式给药分别选用幼年和成年大鼠分别建立了急性和慢性铅中毒模型造模成功后进行水迷宫实验了解大鼠的记忆和识别能力处死大鼠后采用病理和免疫组化方法研究不同类型铅中毒大鼠中枢神经系统的神经元、星状胶质细胞的生长情况了解神经元环路的变化情况。采用原子吸收测定、生化试剂测定、酶联免疫法方法和分子生物学技术研究中枢神经系统的氧化和抗氧化防御系统了解活性氧的产生情况和氧化应急的损伤情况同时分析脑组织中钙离子代谢、多种激酶的活性及主要神经递质和信号分子的变化情况了解铅中毒对大脑内的代谢和信息传递的影响。通过一系列实验对不同类型铅中毒大鼠的行为学解剖组织学、代谢学和信息学等多方面比较寻找两种大鼠铅中毒模型的差异进行有关指标的进一步研究寻找可能的新机制为铅对中枢神经系统的毒性机制进一步研究提供理论支持同时为排铅药物筛选研究提供实验基础。 铅中毒大鼠大脑中枢神经系统。 2 不同类型铅中毒大鼠模型的神经系统毒性学习记忆障碍机制比较研究 一、项目可行性报告 一立项的背景和意义 铅对环境的污染日益加剧已由职业环境扩展到日常环境.实际上随着我国的社会经济发展特别是汽车保有量和房屋装修业的迅速增加每个城市都面临环境中的铅负荷不断上升的危险而铅可通过皮肤、呼吸道、消化道进入人体诱发肾脏、神经系统、造血系统损伤1。1999年8月全国部分地区和城市儿童血铅水平调查平均38.8的儿童血铅水平超过100 g·dL-1。也就是说我国城市儿童中有约40左右受到铅中毒的威胁2。近年人们生活条件提高了但铅中毒事件任然严重国内外常常报道铅超标或中毒的事件34美国、加拿大等均报道交通警察血铅超标严重4。浙江省近年不同地方报道中毒的事件 2005年浙江中部的东阳、兰溪、永康、义乌、浦江、绍兴等市县的锡箔产业的大量从业人员和上千名儿童发生铅中毒事件2011年在浙江台州和德清的电池生产厂引起周围数百位居民铅中毒事件。 由此可见铅中毒已经是比较严重的社会问题探索铅中毒的毒性机理研究防治措施和筛选相关药物有非常重要的现实意义。在铅中毒对人体的危害方面研究发现5-6铅能引起贫血脑发育、肝、肾功能损害降低免疫功能致癌等作用。其中对脑的影响最为严重由于脑是铅最敏感的器官微量铅即可引起神经系统的功能障碍严重中毒可引起中枢神经细胞退行性改变导致脑病儿童可导致智力低下认知缺陷5因此铅中毒的很多深入研究是关于脑部的毒性损害。 铅对脑的损害集中在一些特殊的区城。最首要的部位包括大脑皮质的额前区海马回和小脑。这些区域的神经元如颗粒细胞和小球周细胞等主要参与学习记忆而在这些区域的胆碱能系统中重要的神经环路如隔-海马、斜角带-嗅球、Meynert基底核NBM-新皮层等具有维持正常的学习记忆功能7-8。星状胶质细 3 胞参与维持正常的学习记忆功能9。铅中毒的一些特征性的临床表现有可能正是与这种特殊的解剖部位的特点密切相关。如大脑皮质额前区的损伤可以引起认知功能的损害并可引起进行性的注意力分散10。 大量研究显示11铅引起氧化应急损伤一方面铅作为氧自由基的启动剂而诱发氧自由基的产生铅通过线粒体产生活性氧同时还可抑制氧自由基的清除酶SODCAT活力使血肝和脑中MDA含量增高。另一方面铅作为琉基的亲合物质易于与含疏基的酶GSHPxG6PDGR或物质GSH结合而使相应酶活力下降和琉基耗竭因此使机体的抗氧化能力下降进一步增强脂质过氧化的毒理效应。Yiin和Lin等人的研究证明12铅能显著增加油酸亚油酸和花生四烯酸中MDA的含量且脂肪酸中双键数目越高其相应体系中MDA含量也越高。铅能诱导花生四烯酸的聚集从而增加细胞膜脂质过氧化的敏感性13。铅在体外能与磷脂双分子膜紧密结合14。体内实验也证明15脂质过氧化水平的增加和磷脂水平的下降与脑区的铅浓度显著相关。因此转变的膜脂质成分可导致细胞膜完整性渗透能力的变化使细胞质膜结构受损细胞内的线粒体和内质网释放凋亡相关物质促进细胞凋亡。 铅可取代钙的作用影响细胞内多种激酶的活性等多个环节铅可以通过与钙离子竞争进入细胞内干预突触前终端钙离子而对LTP起作用16。还可作用于突触后膜上电压依赖性的钙离子通道阻断钙离子电流6铅可以激活蛋白激酶CPKC系统引起细胞内游离钙浓度的升高而胞内钙离子超载是神经细胞损伤死亡的重要原因。铅还作用于钙调素-蛋白激酶和cAMP-蛋白激酶等使钙