高效液相层析法及其在生化研究中的应用教学幻灯片.pptVIP

高效液相层析法 及其在生化研究中的应用 03级 化学生物专业 李楠 高效液相层析法（HPLC,high performance liquid chromatography）是近二十年来发展起来的一项新颖快速的分离技术。它是在经典液相层析法基础上，引进了气相层析的理论具有气相层析的全部优点。由于HPLC分离能力强、测定灵敏度高,选择性高，分析速度快，可在室温下进行，应用范围极广，无论是极性还是非极性，小分子还是大分子，热稳定还是不稳定的化合物均可用此法测定。对蛋白质、核酸、氨基酸、生物碱、类固醇和类脂等尤为有利。 层析法的本质 色谱柱高选择性的高效能的分离作用与高检测技术的结合。混合组分的样品在色谱柱中分离的依据是：同一时刻进入色谱柱中的各组分，由于在流动相和固定相之间溶解，吸附或离子交换等作用的不同，随流动相在色普柱中运行时，在两相间进行重复多次（103－106）的分配过程，使原来分配系数具有微小差别的各组分产生了保留能力明显差别的效果。进而各组分在色普柱中移动速度不同，经过一定长度的色普柱后，彼此分离开，最后按顺序进入信号检测器，在记录仪上或色普数据机上显示出各组分的色普行为和谱峰数值。 层析法可用于定性，半定量，定量的测定。其定性分析的依据是出峰的时间。而定量的依据是；组分重量或在在载气中