电镜技术和超薄切片技术研究生课件.ppt

脱氢酶常用的捕捉剂为铁氰化物，它在酶的作用下被还原为亚铁氰化物，在铜离子的存在下进一步形成高度不溶性的亚铁氰化铜沉淀。 酶细胞化学的常规操作流程 1、固定：常规固定液选取2.5%戊二醛和4%多聚甲醛混合液作为固定 液，常用的缓冲液有二甲砷酸钠缓冲液及Tris缓冲液等。 2、切片：一般采用组织切片机进行切片，厚度在40～60μm，也可以 用冰冻切片机切片。 3、漂洗：用配置孵育液的缓冲液进行漂洗3次，每次10分钟。 4、孵育：孵育时必须在使用前配置新鲜孵育液。将切片放入孵育液内， 在震荡式恒温水浴箱中孵育，孵育温度一般为37℃。 5、漂洗：用配置孵育液的缓冲液进行漂洗3次，每次10分钟，然后用 0.1M二甲砷酸钠缓冲液漂洗3次，每次10分钟，所用缓冲液 要保持在4℃左右。 6、后固定：用0.1M二甲砷酸钠缓冲液配置的1%锇酸固定1小时。 脱水、浸透、包埋、切片同常规超薄切片制作。 7、电镜观察：超薄切片经烘干后直接进行电镜观察。如果反差不好， 可以进行铅—铀双重染色，但必须有不染色的切片对照。 免疫电镜胶体金标记技术 免疫电镜胶体金标记技术也称金标法（或免疫