第六章 工业微生物育种.pptVIP

第六章 工业微生物诱变育种 诱变育种 是指利用物理或化学诱变剂处理均匀分散的微生物细胞群，在促进其突变频率显著提高的基础上，从中挑选少数符合目的的突变株，以供科学实验或生产实践使用。 诱变育种目的 提高有效产物的产量 改变菌种特性，提高产品质量 简化工艺条件 开发新品种 诱变育种的过程 选择合适的出发菌株 制备待处理的菌悬液 诱变处理 筛选 保藏和扩大试验 一、诱变育种的实验准备 （一）诱变前对出发菌株的了解 1、区分不同菌落类型 2、出现不同菌落类型原因 （二）全面了解菌种特性和生产性能的关系 （三）了解影响菌种生长发育的主要因素 1、培养基 2、斜面培养基的制备技术 3、接种量 4、温度 5、湿度 6、药品和原材料质量 （四）了解菌种有效产物中的各种组分在代谢合成过程中与培养条件的关系 （五）建立一个准确、简便、快速检测产物的方法 （六）研究最佳的菌种保藏培养基和培养条件 二、诱变育种的步骤及方法 （一）选择合适的出发菌株 1、对一般菌株的要求 野生菌株对诱变剂敏感 最好选用来自生产中的自发突变菌株。 具有有利性状（如高产、生长速度快、营养要求粗放、标记明显等）； 可选用已发生过其他突变的菌株。 2、选择具有一定生产能力或某种特性的菌株作为出发菌株 3、选择纯种做出发菌株 4、选择出发菌株应考虑其稳定性 5、连续诱变育种过程中如何选择出发菌株 6、采用多出发菌株 7、了解菌种代谢特点 （三）制备待处理的菌悬液 （六）影响突变率的因素 1、菌种遗传特性不同 2、菌体细胞壁结构不同 3、环境条件的影响 1）诱变前预培养 2）温度、pH、氧气等外界条件对诱变效应的影响 3）菌落密度效应 （3）浓度梯度法 （4）影印平板法 （5）琼脂块大通量筛选方法 2. 复筛（以质为主，定量测定） （1）摇瓶培养，直接检测所需产物 （2）产物活性检查 琼脂平板活性圈法 纸片法 琼脂薄层纸片法 （3）复筛数据的调整 菌落、菌体形态观察进一步筛选突变株； 培养基和条件的调整； 菌株纯度及遗传特性进行研究 1. 抗性突变株的筛选 (1) 抗终代谢物结构类似物突变株的筛选 用途：筛选相应代谢物的高产菌株 （2）抗药性突变株 用途：筛选相应药物(抗生素) 的高产菌株或遗传标记制作 筛选的方法: a. 高于临界浓度的平板进行分离； b. 梯度平板法 a. 不含维生素的酪素水解液或氨基酸混合液 b. 维生素混合液 c. 0.1%碱水解酵母核酸液 以氨基酸缺陷为例进行说明 将21种氨基酸按右表分为6组 特点：每2组只有一种共同物质 （3）营养缺陷型的用途 生产菌 (氨基酸、核苷酸、维生素等高产菌需求)； 研究代谢途径和杂交、转化等遗传规律的遗传标记。 1. 从生产中选育 2. 定向培育优良品种 一般指用特定因素长期处理微生物群体，同时不断地对它们进行移种传代，以达到积累并选择相应的自发突变株的目的。 例：卡介苗（牛型结核分枝杆菌的减毒活菌苗） 思考题 1、 诱变剂主要有哪三类？ 2、 简述紫外线照射诱变育种的原理、方法和基 本步骤。 3、 化学诱变剂主要有哪些种类？ 4、 烷化剂的作用机制是什么？ 5、 简述亚硝基胍诱变育种的原理、过程和安全 注意事项。 6、 生物诱变剂按照诱变方式主要分为哪三类? 为什么在筛选突变株时,不能直接用代谢产物,而必须用其结构类似物? 1、DNA链断裂的分子机制 （1）脱氧戊糖和磷酸二酯键的破坏（直接） （2）碱基损伤 2、不同条件下辐射所致的DNA链断裂 1）充氧溶液中 DNA双链上引起SSB的概率均等，产生与放置时间、溶液PH有关。 2）固态下照射DNA 产生SSB与 PH有关。 3）细胞中DNA受照射：与周围介质有关 二、DNA交联（DNA cross-linking) 交联种类 1、链间交联：DNA双螺旋结构中，一条链上的碱基与其互补链上的碱基以共价键结合。 2、链内交联：DNA分子同一条链上的两个碱基相互以共价键结合 3、DNA－蛋白质交联（DNA-protein cross-linking ，DPC）：DNA与蛋白质以共价键结合 三、自发突变与育种 一、电离辐射致DNA的损伤 电离辐射损伤DNA途径: 直接作用 指射线直接作用于DNA分子，通过电离和激发使DNA受到损伤。 间接作用 指射线与DNA周围其它原子或分