专题二 微生物的实验室培养教学讲义.ppt

倒平板技术 2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。 1 2 3 4 倒平板技术 1 2 3 4 3.用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。 倒平板技术 1 2 3 4 4.等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 问题讨论 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 【例2】进行细菌接种培养实验时，以下哪个操作步骤是非必要的？ A．双手带上胶手套 B．接种前后都灼烧接种环 C．接种前后都灼烧菌种试管口和待接种斜面 试管口 D．要丢弃带菌培养基前，进行高压蒸汽灭菌 或加热灭菌 （二）纯化大肠杆菌 接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法 微生物的接种技术： 1.平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。 平板划线的操作方法 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 固体培养基：菌落，菌苔 固体培养基 液体培养基 有无 凝固剂琼脂 半固体培养基 无动力 有动力(弥散) (是否运动？) 【例】以下是单克隆抗体制备流程示意图： 根据培养基的________分类，图中HAT培养基属于________培养基 选择 用途 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 (参考教材附录内容) 3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 ⑴碳源 无机碳源： 有机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 牛肉膏、蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 ⑵氮源 无机氮源： 有机氮源： N2、NH4+、NO3-、NH3等 牛肉膏蛋白胨、酵母膏、尿素等 注：含CHON的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源 主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物 ①合成微生物的细胞物质和一些代谢产物 ②异养微生物的能源 微生物生长不可缺少的微量有机物如：维生素、氨基酸、碱基等 生长因子： 牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类。的水溶性物质。 牛肉膏为微生物提供碳源、氮源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素。 氮源、能源、生长因子 碳源、能源、生长因子 培养基配置原则 目的明确 营养协调 理化条件适宜 经济节约 根据不同的微生物的营养要求配制针对强的培养基。 培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累 如：pH 练习1（多项选择） 1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是 A 光合细菌 B 根瘤菌 C 硝化细菌 D 乳酸菌 2、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源是 A 糖、有机酸等 B 二氧化碳、碳酸盐 C 蛋白质 D 无机氮化物 3、下列叙述不正确的是 A 培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B 液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同 C 微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌 A