ABO血型鉴定心音听诊血压测量及蛙心灌流.pptVIP

1.学习离体蛙心灌流方法; 2.了解离体器官的研究方法； 3.观察K+、Na+、Ca2+等离子、肾上腺素、 乙酰胆碱、酸硷度诸因素对心脏活动的影响， 理解心脏正常活动需要一适当的理化环境; 蛙心灌流 【目的】 * 心脏的正常节律性活动必须在适宜的理化环境里才能维持，一旦适宜的理化环境(内环境)被干扰或破坏，心脏活动就会受到影响。 心脏受自主性神经的双重支配，交感神经兴奋时，其末梢释放去甲肾上腺素，作用于心脏β1受体使心肌收缩力加强，传导增快，心率加快；而迷走神经兴奋时，其末梢释放乙酰胆碱，作用于心脏M受体使心肌收缩力减弱，心率减慢。 蛙心离体后，用理化性质近似于血浆的任氏液灌流，在一定时间内，可保持节律性收缩和舒张。改变任氏液的组成成分，心脏跳动的节律、频率和幅度都可随之发生改变。 【原理】 * 【实验步骤及观察项目】 1．离体心脏制备 （1）取一青蛙，破坏脑和脊髓，暴露心脏。 （2）用小镊子夹起心包膜，沿心轴剪开心包膜，仔细辨认心房、心室、动脉圆锥、主动脉、静脉窦、前后腔静脉等解剖结构。 录象 * （3）在左主动脉下穿一根线，靠近动脉分叉处结扎左主动脉，另一线置主动脉圆锥下备用。提起左主动脉结扎线，用眼科剪在左主动脉靠近动脉圆锥处剪一小斜口，将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入主动脉，插至动脉圆锥时略向后退，在心室收缩时，向心室后壁方向下插，经主动脉瓣插入心室腔内，一次不成可反复多次稍退后插，但不可过深顶室壁以免堵住管口。插管若成功进入心室，管内液面会随着心室跳动而上下移动或看到血如喷泉涌入插管。用动脉圆锥下的备用线结扎插管，并将结扎线固定于插管侧面的小突起上防止滑脱。 * （4）提起插管，在结扎线远端分别剪断左、右主动脉，轻轻 提起插管及心脏，用线将左、右肺前后腔静脉结扎，注意：在结扎前用小弯镊沿静脉窦往下压，结扎线在镊子下方结扎，以保护静脉窦防止误扎，否则出现窦房阻滞；最后在结扎线下方剪断上述静脉而将心脏离体。用滴管吸净插管内血液，加入新鲜任氏液，反复冲洗数次，直至液体澄清。保持灌流液面高度恒定（1～2厘米），即可进行实验。 （5）用试管夹将蛙心插管固定于铁支架上，将连于蛙心夹的 线经滑轮转挂于张力换能器，注意避免液体滴到换能器上漏电锈蚀，适当调整前负荷即可记录。 * 2．仪器线路连接 将张力换能器插头连接至BL系统第1通道（或MS系统第2道的插座） 3. 软件操作 开机并启动相关实验系统。 （1）BL系统 ①“实验项目”→“循环实验” →“蛙心灌流”。 ②G、T、F可适当调节，让波形幅度大小适宜。 ③扫描速度可根据波形进行调节，让波形分开易辩。 * 4．观察项目 （1）描记正常心跳曲线（曲线疏密表示心跳频率；曲线幅度表示心脏收缩力的强弱；曲线的规律性表示心跳的节律性）。 （2）吸出插管内全部灌流液，换入等量的0.65%NaC1，观察心跳曲线。当效应明显时应及时吸出灌流液，并用新鲜任氏液反复换洗，直至恢复适宜的心跳曲线为止。调节最后一次液面高度同前（1～2厘米）。 （3）滴入2％CaC12 1～2滴，观察及换液方法同上。 （4）滴入l％KCl 1～2滴，观察及换液方法同上。 （5）滴入3％乳酸1～2滴，效应出现后立即滴入2.5％NaHCO3 数滴，效应明显时及时吸出灌流液，换液方法同上。 * （6）滴入1∶10 000肾上腺素1～2滴，观察及换液方法同上。 （7）滴入1∶100 000乙酰胆碱１滴，效应明显时应立即吸出灌流液，并用新鲜任氏液换洗，方法同上。 （8）滴入0.1%阿托品1滴，效应出现后立即滴入1∶100 000乙酰胆碱1滴，观察结果并与（8）比较，然后用任氏液换洗，方法同上。 * 【注意事项】 1．换洗时可暂停记录，且最后一次加液的液面应保持同一高度. 2．滴入试剂时，先加1～2滴，观察效应。如不明显可再补加。 3．每项实验均应有前后对照。 4．每次加药时，应作标记。 5．随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。 6．吸任氏液的吸管和吸蛙心插管内液的吸管要分开（专管专用），以免影响实验结果。 7.有些步骤，如滴加KCl和Ach时，在刚出现抑制效应时立即冲洗，否则作用过久抑制过深可能难以抢救。 * ABO血型鉴定 * 实验原理 人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。 * 【实验材料】 　　 1．标准血清 A型标准血清含抗B凝集素 使B型、AB型红细胞的凝集原凝集 B型标准血清含