生物竞赛生物化学33DNA复制顶级资源生物化学原理第二版.pptVIP

* 9 * 9 几种真核生物的端粒重复序列 物种名称 重复序列 四膜虫、草履虫和纤毛虫 T2G4 酵母 (TG)1~3TG2~3 拟南芥 T3AG3 人 T2AG3 * 端聚酶的结构模型 * 端聚酶的作用机理 * 端粒酶活性与细胞分裂能力的关系 * DNA复制的起始——起始于OriC的识别，结束于引发体的形成 DNA复制的延伸 （1）复制体的形成 （2）前导链合成 （3）后随链合成 （4）前导链合成和后随链合成之间的协调 DNA复制的终止和子代DNA的分离 * 参与大肠杆菌DNA复制的主要蛋白质或酶的名称和功能 蛋白质名称 功能 DNA旋转酶 II型拓扑异构酶，负责清除复制叉前进中的拓扑学障碍 SSB 单链结合蛋白 DnaA蛋白 复制起始因子，识别复制起始区OriC DnaB蛋白 DNA解链酶 DnaC蛋白 招募DnaB蛋白到复制叉 DnaG蛋白 DNA引发酶，引物合成 DnaT蛋白 辅助DnaC蛋白的作用 HU蛋白 类似于真核细胞的组蛋白，结合DNA并使DNA弯曲 PriA蛋白 引发体的装配 PriB蛋白 引发体的装配 PriC蛋白 引发体的装配 DNA聚合酶III DNA链的延伸 DNA聚合酶I 切除引物，填补空隙 DNA连接酶 缝合相邻的冈崎片段 DNA拓扑异构酶IV 分离子代DNA Tus 复制终止 * 大肠杆菌DNA复制起始区的结构 * 大肠杆菌DNA复制过程中引发体的形成 * 大肠杆菌DNA复制过程中复制体的形成 * 大肠杆菌DNA复制的延伸 * 大肠杆菌DNA复制终止区的结构 * 子代DNA的分离 * 某些噬菌体（如M13和ФX174）DNA和一些小的质粒（如枯草杆菌内的pIM13质粒）在宿主细胞内通过滚环复制方式扩增DNA。 真核细胞的某些基因，如某些两栖动物卵母细胞内的rRNA基因和哺乳动物细胞内的二氢叶酸还原酶基因，在特定的情况下通过滚环复制在较短的时间内迅速增加目标基因的拷贝数。 * 滚环复制 * 线粒体和叶绿体DNA通常以D-环的方式进行复制。少数病毒（如腺病毒）也进行D-环复制 。 催化线粒体DNA复制的酶是DNA聚合酶γ，两条链的合成都需要先合成RNA引物，但都不形成冈崎片段，因此都是连续合成。 两条子链的合成在时间上不同步。 * D环复制 * 真核细胞的DNA复制在很多方面与细菌极为相似，但也有几点不同于细菌的地方： （1）需要解决核小体和染色质结构对DNA复制构成的障碍； （2）复制叉移动的速度远低于细菌； （3）具有多个复制子，这可以弥补复制叉移动速度低对整个DNA复制速度的制约； （4）冈崎片段的长度小于细菌； （5）复制被限制在细胞周期的S期，并受到严格的调控； （6）在第一轮复制结束之前不能进行第二轮复制，细菌在第一轮复制还没结束的时候就可以进行第二轮复制； （7）需要端聚酶解决染色体DNA末端复制问题 （8）复制终止没有特定的像大肠杆菌Ter序列的终止区。 * 真核细胞DNA复制叉的结构模型 * SV40的 DNA复制模型 * 使用端聚酶； 将线形DNA暂时转变为环形DNA； 经重组形成串联体； 滚环复制； 使用蛋白质作为引物。 * T7噬菌体DNA末端DNA的复制 * 在DNA复制上，古菌与细菌相似的是，它也不需要也没有端聚酶，因为其染色体DNA是环状，无端粒结构，而在其他方面更像真核生物，主要表现在： DNA模板与组蛋白形成核小体，而核小体结构对复制会产生一定影响； 许多古菌具有多个复制起始区； 参与复制的许多蛋白质和酶在结构与功能上非常接近真核生物。例如，参与DNA复制的主要聚合酶与真核生物一样，为B类，而细菌使用的是C类 。 * 参与复制的蛋白质和酶 细菌 真核生物 古菌 起始蛋白 DnaA ORC Orc1/Cdc6 解链酶 DnaB MCM复合物 MCM 解链酶转载物 DnaC Cdc6+Cdr1 Orc1/Cdc6 DNA聚合酶 C类 B类 B类 滑动钳 DNA聚合酶 III的β亚基 PCNA PCNA 滑动钳转载物 γ亚基复合物 RF-C RF-C DNA连接酶 依赖于NAD+ 依赖于ATP 依赖于ATP 切除引物的酶 DNA聚合酶I/RNaseH RNaseH/ FEN1 RNaseH/ FEN1 端聚酶 无 有 无 细菌、古菌和真核生物参与DNA复制的主要蛋白质和酶的比较 * 四种dNTPs浓度的平衡 DNA聚合酶的高度选择性 DNA聚合酶的自我校对 错配修复 使用RNA作为引物 * 复错不要紧， 只要校对真， 错了我一个， 还有后来酶。 * DNA复制的调控主要集中在起始阶段，现分别介绍原核细胞和真核细胞的DNA复制的起始过程是如何受到调控的。 细菌DNA复制起始的调控 在大肠杆菌，由Dam甲基化酶和Dn