核酸的序列分析.pptVIP

第五节 核苷酸序列分析 测序的常用方法 测序过程: 1.模板与引物杂交 2.引物的延长和合成阻断 四个试管分别加入 DNA聚合酶 dNTP 标记底物 终止剂不同 ddA ddG ddC ddT 四个试管中所有产物是一系列长度只差一个核苷酸的聚合链 3.电泳 4.放射自显影得到直读图象 一、化学裂解法测序的原理 1、用放射性核素标记待测DNA一侧末端 2、将标记DNA分为G、A+G、C+T、C 4个反应体系 3、用不同的化学试剂处理不同反应体系，随机断裂DNA片段某种碱基中的任何一个，产生一组一端为放射线标记的末端，另一端为不同大小的DNA片段的混合物 4、电泳分离，放射自显影得到互相错落的梯形图谱，即可读出DNA序列 化学裂解法的特点 优点： 1、所测序列直接来源于所测 DNA ，避免了 DNA 复制中错误 dNTP 的掺入。 2、可直接对合成的寡核苷酸测序，可分析甲基化修饰等，以及研究 DNA 的二级结构及蛋白质与 DNA 的相互作用等。 缺点： 操作复杂，读序困难。 5.3 DNA测序自动化和大规模测序 特点 原理同末端终止法 标记物为荧光染料 激光扫描自动测序 结果清晰、准确、分辨率高 测序速度快 200bp/h DNA自动测序与手工测序的不同点 1、标记物不同：手工测序采用放射性核素标记，而自动测序采用4种荧光染料分别标