EASYspin Plus 植物RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书.docVIP

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:// 杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:// 版本号:160120 EASYspin Plus Plant RNA Kit EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒 目录号：RN38 适用范围： 适用于快速提取植物组织细胞总RNA，使用独有基因组DNA清除柱技术可有效清除电泳可见gDNA残留，RNA可用于反转录PCR，荧光定量PCR等。 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50次(RN3802) 裂解液RLT 室温 50 ml 裂解液CLB 室温 8 ml 裂解液RLT Plus 室温 25 ml 去蛋白液RW1 室温 40 ml 漂洗液RW 室温 10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free H2O 室温 10 ml PLANTaid 室温 5 ml 基因组DNA清除柱 和收集管 室温 50套 RNase-free 吸附柱RA和收集管 室温 50套 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项： 不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃ 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 注意事项 所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 需要自备乙醇，研钵(可选)。 样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 裂解液RLT和RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 关于DNA 的微量残留: 一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留（DNase消化也无法做到100%无残留），本公司的EASYspin Plus RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术，绝大多数DNA已经被清除，不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时： 选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup) ，请联系我们索取具体操作说明书。 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I柱上消化处理。购买DNA酶柱上消化试剂盒(货号：RN34)前可先索取具体操作说明书。 仔细阅读补充说明2，如果裂解液CLB效果好，可以联系我们单独订购裂解液CLB。以后可直接订购RN53 EASYspin Plus 多糖多酚复杂植物RNA快速提取试剂盒。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示： 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇! 直接研磨法（提取简单植物样品推荐此法，但是简单样品也可以用液氮研磨法）: a. 新鲜植物组织称重后取100mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100mg放入研钵）， 加入10体积（1ml）RLT和1体积（100μl） PLANTaid 室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RLT立刻充分接触以抑制RNA酶活性。 注：PLANTaid是提取多糖多酚次级代谢产物色素含量丰富的困难样品不可缺少成分。 b. 将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15秒，13，000rpm离心5-10分钟，沉淀不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid。 c. 取480μl裂解物上清（在不超过基因组DNA清除柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。 d. 立刻接操作步骤的步骤3。 液氮研磨法（提取复杂，易降解样品时推荐此法）: a. 取500μl裂解液RLT，转入1.5ml离心管中，加入50μl PLANTaid混匀备用。 b. 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取50mg细粉转入上述装有RLT和PLANTaid的离心管, 立