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本诊断规程于 2016 年 8 月由标准委代表植检委通过。
本附件是 ISPM 27 号标准规定的一部分。
ISPM 27 号标准
限定有害生物诊断规程
DP 15 ：柑橘衰退病毒
（Citrus tristeza virus）
2016 年通过；2019 年出台
目录
1. 有害生物信息 3
2. 分类学信息 4
3. 检测和鉴定 4
3.1 寄主范围 5
3.2 症状 5
3.3 生物学检测6
3.4 取样以及用于血清学和分子检测的样品制备 7
3.4.1 取样 7
3.4.2 制备组织印迹样品8
制备血清学检测的组织印迹样品 8
制备用于分子扩增检测的组织印迹样品和蚜虫压片样品8
3.4.3 制备用于血清学检测及分子扩增检测的植物提取物9
3.5 血清学检测9
3.5.1 直接组织印迹－ELISA 9
3.5.2 双抗夹心（DAS ）－ELISA 10
3.6 分子检测 11
3.6.1 RNA 纯化、免疫捕获和 cDNA 合成11
3.6. 1.1 RNA 纯化 11
免疫捕获 12
cDNA 合成12
国际植物保护公约 DP 15-1
DP 15 限定有害生物诊断规程
3.6.2 IC-RT-PCR 12
3.6.3 独立封闭的离心管内进行免疫捕获巢式 RT-PCR 13
3.6.4 RT-PCR 和巢式 RT-PCR 的一般注意事项 13
3.6.5 实时 RT-PCR 14
3.6.7 常规和实时 RT-PCR 结果分析15
3.6.1 分子试验的对照15
常规 RT-PCR 和 IC-RT-PCR 15
实时 RT-PCR 16
3.7 通过实验效果研究加以确认 16
4. 强毒力 CTV 株系鉴定17
4.1 生物学检测18
4.2 基于使用 MCA13 的血清学检测18
4.2.1 直接组织印迹 ELISA 18
4.2.2 DAS-ELISA 18
5. 记录18
6. 获取进一步信息的联系点19
7. 致谢19
8. 参考文献19
9. 图24
DP 15-2 国际植物保护公约
限定有害生物诊断规程 DP 15
1. 有害生
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