实验八、植物组织中超氧物歧化酶的提取及酶活性测定.pptVIP

实验七、植物组织中超氧化物歧化酶的提取及活性测定 一、实验目的 掌握SOD酶的提取方法及原理 掌握氮蓝四唑（NBT）法测定SOD酶活性。 超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，EC1.15.1.1，简称SOD）是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶，能清除体内有氧代谢产生的超氧阴离子（O2·-）；是生物体防御氧化损伤的重要金属酶类，对机体的细胞具有保护作用。 动植物及微生物细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8磷酸缓冲液提取出。 在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。 三、实验材料、仪器及试剂 1 材料：植物叶片（去叶脉） 2 仪器设备：高速台式离心机；研钵；分光光度计；荧光灯（反应试管处照度为4000Lx）；试管数支 3 试剂： 130mmol/L 甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml； 3.750μmol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存； 100μmol/L