有机酸测定2-4研究报告.ppt

提取： 一般的果蔬样品，与水1︰1研磨，过滤； 干果、籽粒，水2-3倍，沸水煮30min，过滤测定。 测定 pH值测定的方法应用最广泛的有：pH试纸法、标准色管比色法和pH计测定法。其中以pH计法最准确，操作也简便、迅速，可排除或减小这些样品中所含的色泽和杂质对测定结果所造成的影响,测得较准确的数据。 pH计的型号很多，使用时参照说明书即可。pH标准溶液可以用国家计量管理机关提供的标准物质按规定配制；或按一般专业书籍上的配方配制。 水果、蔬菜等有机酸组分的测定 ( 高效液相色谱法 ) 有机酸是果、蔬的主要组成分之一。果、蔬中有机酸的种类和含量变化很大。这些变化决定于品种、成熟度、气候条件及其它因素。果蔬中苹果酸和柠檬酸的一般含量范围见表17-1。 方法原理 样品经处理后，直接将样品液注入反相化学键合相色谱体系，用5g·L-1(NH4)2HPO4 为流动相，有机酸在两相中分配分离； 按照其碳原子数由少到多的顺序从色谱柱中洗脱下来； 用紫外检测器(214nm)或示差折光检测器或二极管阵列检测器检测并与标准样品比较定量。 操作步骤 有机酸标准溶液的制备 分别取适量有机酸单个标准样，如酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸等于25mL容量瓶中，用0.01mo1/LNaOH溶液溶解后定容，参照表17-1的含量范围配制标准浓度系列。 样品溶液的制备 液体样品：需经合适倍数稀释，用Sep-PAK C18净化柱处理（有色素等杂质,会干扰有机酸的分析,同时造成色谱柱的污染，因此,在样品前处理中必须将其去除），收集馏出液，经0.45μm微孔滤膜过滤后备用。 固体或半固体样品：要将其捣碎，均质后，加入一定量的0.01mo1/LNaOH（或80％乙醇）溶液提取。经离心分离或过滤后收集提取液，用Sep-PAK C18（Waters Sep-Pak C18小柱固相萃取）净化柱处理，收集馏出液。经0.45μm微孔滤膜过滤后备用。 该技术所用设备简单，价格低廉，溶剂用量较少，能够高效率、有选择地分离和富集极性不同的样品，是一种可靠性高和实用的现代分离技术。SPE 改善、简化了分离，提高了色谱柱寿命，降低了检测限 色谱条件 固定相：C18键合相 流动相：5g·L-1(NH4)2HPO4，pH=2.5 流 速：2mL·min-1 进样量：10μL 检测器：紫外检测器，214nm，0.1AUFS 最常用的“万能柱”填料为“C18”，简称“ODS”柱，即十八烷基硅烷键合硅胶填料（Octadecylsilyl，简称ODS）。这种填料在反相色谱中发挥着极为重要的作用。由于C18(ODS)是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能力，因此在生物化学分析工作中应用的最为广泛，近年来，为适应氨基酸、小肽等生物分子的分析任务，又发展了CH、C3、C4等短链烷基键合相和大孔硅胶（20～40μm）。 按键合到基质上的官能团可分为： 反相柱：填料是非极性的，官能团为烷烃，例如：C18(ODS)、C8、C4等。 正相柱：填料是极性的，官能团为 －CN氰基、－NH2氨基等。 测定和计算 将待测样10μL注入色谱仪，根据其峰高或峰面积设定有关最佳参数如最小峰面积。 注入有机酸标准系列溶液10μL，进行色谱分析。 以各标准溶液的保留时间定性。 定性：将各种单一有机酸液依次进样，记录各自保留时间。 方法 a.在相同的色谱条件下,将样品色谱图与有机酸标准液色谱图进行对照,根据保留时间确定样品中的有机酸; b.在样品中加入有机酸的标准液,根据峰高的突增来进一步验证色谱峰的归属; c．比较各有机酸在标准液和样液色谱图中的紫外吸收图谱。 有机酸的定量： 外标法，将不同浓度酸液从低浓度到高浓度依次进样， 计算各自的峰面积，每个样平行进5次，作各种有机酸的峰面积或峰高与浓度的标准曲线。根据有机酸标准系列溶液各响应值(峰高或峰面积)作一响应值与浓度的标准曲线。 分别注入待测样品10μL，进行色谱分析。 根据各待测样品的响应值，在标准曲线上查出其相应的含量。 标准曲线制作 第四章 有机酸和维生素的分析第一节 概述 果实具有酸味，是因为含有各种有机酸，其中以柠檬酸、苹果酸、酒石酸为主，这三种酸通称为果酸，此外，还有草酸、水杨酸及少量的挥发性蚁酸、醋酸、丁酸，这些挥发酸含量虽少，但它们的酯类则是重要的芳香物质，给予果实特有香气。 一定的酸度含量能使农产品、食品具有一定的风味,质地和色泽,如：苹果中所含的苹果酸;柠檬中所含的柠檬酸等成分,它们使这些水果具有人们喜爱的酸味和酸甜味。有机酸具有防腐和抗氧化作用，但过量时又显示出不良的品质。测定果蔬的酸度及其与糖含量的比值，能判断果蔬的成熟度和品质。 如：采后随着时间延长，