石蜡切片免疫荧光染色方法.pdf

对于石蜡切片： 1、 烤片： 60℃ 60 分钟 2、 脱蜡：二甲苯中Ⅰ脱蜡 15 分钟 → 二甲苯Ⅱ脱蜡 15 分钟 →无水乙醇Ⅰ 5 分钟 →无水乙醇Ⅱ 5 分钟 →90%乙醇Ⅰ 5 分钟 →90%乙醇Ⅱ5 分钟 →70％乙醇 5 分钟 →蒸馏水 5 分钟 → 蒸馏水 5 分钟。 3、抗原修复：高压修复，事先烧开锅中的水，修复盒中加入 0.01mol/l 柠檬酸 钠， pH6.0( 柠檬酸三钠 3g, 柠檬酸 0.4g 加入 1000ml 蒸馏水中 ) ，上汽后加热 10 分钟，关火。修复盒取出，放入装有自来水的瓷缸中缓慢冷却至室温。 2. 去除内源性酶：玻片取出放入湿盒，加 3%H2O22 (2ml H2O22 加入 18ml 蒸馏水 中，现配现用，避光 ) ，室温孵育 10 分钟， PBS洗 3 次，每次 5 分钟。 （也可不 用去除内源性酶） 。 3. 封闭 (Blocking) 加 10%正常驴血清（原液 100ul+900ulPBS,1ml 够用 30 张片子），室温 孵育封闭 30 分