ATPTCP药敏检测.pptVIP

ATP-TCA与化疗药物选择 第四军医大学肿瘤研究所 筛选 药物——筛选 方案 周期特异 周期非特异 不同机理 形态/行为：侵袭能力、生长速度、对激素的反应、对抗癌药的敏感性、免疫原性等方面差异 变 变 变 药敏检测方法应该具备——基本条件 标本可评价率高 检测敏感、客观、可靠 体内、外结果一致性高 目前主要的药敏检测方法及问题 集落形成法（HTCA） 标本可评价率低，仅有40~70％。 实验周期长，需要4周以上 测试药物种类和数量有限 操作繁琐，难以标准化 阳性预测值较低，仅有40～60％ 四唑蓝比色法 (MTT) 敏感性较差，最低仅能检测500个细胞 ? 量程较小，有效量程在2.0以内 细胞毒性差异染色法 (DiSC) 可适用标本类型不广，目前仅用于血液肿瘤 人为判断因素较大，难以推广 标本可评价率不高，仅有70～80％ 阳性预测值较低，仅有70～80％ 胸腺嘧啶掺入法 (3H-T) 实验人员接触放射，不利于健康 标本可评价率不高，仅有70～80％ ? 测试结果仅能反映少量处于增殖相的肿瘤细胞 对某些药物的测试结果存在假阴性 ATP-TCA检测技术的优点 敏感性好 可检测10个细胞。其他技术需500个细胞 以上；同时动态检测6个剂量下药物对肿瘤 的杀伤作用 量程宽 线性范围为10～105个细胞/孔（96孔培 养板） 精密度好 变异系数（CV）小于国家标准（10%） 结果准确 整体预测值为86% 可评价率高 标本可评价率在90%以上 高通量检测 适合96、384、1536孔板检测分析 检测快速 完成ATP检测仅需30分钟，其它需1～4h 自动化程度高 实验数据自动分析，结果直观可靠 ATP-TCA药敏检测试剂组成 1. 组织消化酶 6.ATP提取液 2. 96孔培养板 7.荧光酶-荧光素 3. 选择培养基 8. ATP生成抑制剂 4. 红细胞裂解液 9.荧光酶工作液 5. ATP标准 ATP + Luciferin + O2 AMP + 2Pi + Photons +Oxylaluciferin 1. 设计个体化治疗方案 2. 筛选有效的联合化疗方案 3. 老药新适应症的筛选 4. 新药最佳适应症的筛选 5. 抗肿瘤药筛选 * * 卵巢癌原发部位、大网膜转移及腹水药敏检测结果 大网膜转移 腹水 原发灶 异质性： 0 50 100 150 200 250 0 20 40 60 80 100 ATP-TCA指导的化疗 (n = 39) 传统化疗(n = 17) p = 0,0009 Weeks % Patients 0 50 100 150 200 250 0 20 40 60 80 100 ATP-TCA指导的化疗 (n = 39) 传统化疗(n = 17) p = 0,0016 Weeks % Patients Overall Survival Progression free Survival 引自Kurbacher CM, Cree IA, Brucker. Anticancer Drugs. 1998, 9: 51-57 传统化疗和ATP-TCA指导的化疗的生存率比较 4.技术流程 Tumor Single Cell suspension Mechanical and enzymatical dissociation Incubation for 5-7 days Addition of drugs/medium ATP- Luminescence ATP extraction and stabilization Software Evaluation Construction of dose-response plots Luciferase *