第7章凝胶层析.pptVIP

* 循环层析 图7.21 人血浆蓝蛋白的循环层析分离 柱：交联葡聚糖凝胶G-100，3.2×93cm；样品：5.2ml（3%）；流速：20ml/h； 洗脱液：0.1mol/L pH8.0 Tris缓冲液（含0.5mol/L NaCl） ? 简单的循环层析装置 选择阀用于选择待循环液或废液，样品从A→D上柱，经B→D洗脱，经检出的废液由E→C排出， 需循环的物质由E→D进入层析柱。 * （三）薄层凝胶层析 用交联葡聚糖作为薄层层析的支撑载体，称“薄层凝胶层析”。 仅适用于分析 。 特点：? 生化分析； 设备简单，操作方便，分离迅速； 分辨率高； 同一薄板可同时分析数个样品； * 第四节 色谱峰变宽的问题 样品的洗脱曲线不是一个窄的矩形峰，而是一个较宽的高斯峰。 洗脱曲线： 样品的分子量分布， 仪器造成的峰加宽效应。 * 一、溶液通过色谱柱造成的峰加宽 Giddings提出的无规则行走模型。 溶质分子本身的运动是无规则的。 （一）分子扩散 （二）涡流扩散 （三）流动相中传质阻力 （三）固定相中传质阻力 * （一）分子扩散 浓度梯度 (HETP)d=2γDm/V （HETP）d—溶质分子纵向扩散对塔板高度的贡献 γ—扰动因子，表示柱内