westernblot相关试剂与步骤.docVIP

., .. .. 参考.资料 Western Blot蛋白测定步骤 三蒸水制备后需要高压消毒 一、组织的采集 （一）器材和试剂准备： 镊子、眼科剪、70%乙醇（三蒸水配制）、1.5mL离心管、液氮 （二）步骤（以心脏为例）: 1、脱颈椎处死小鼠，读取小鼠编号 2、乙醇消毒胸部，剪开胸腔，剪下心脏（一颗心脏约100mg），排除血液，放入离心管，投入液氮中 3、组织于-80摄氏度冻存 二、组织蛋白的提取： （一）器材和试剂准备： 4mL离心管、15mL管、研磨机、镊子、冰盒、离心机、 RIPA蛋白裂解液（Radio Immunoprecipitation Assay，详见下载的网页）（碧云天公司）、PMSF （Phenylmethanesulfonyl fluoride，苯甲基磺酰氟，详见下载的网页prod号36978，Thermo Scientific）、70%乙醇、三蒸水 （二）步骤 1、准备好三管10mL70%乙醇、一管三蒸水；取出RIPA和PMSF解冻 2、按照1mLPIRA ：10uLPMSF ：100mg组织的比例，加试剂和组织于4mL离心管 3、按照三管10mL70%乙醇、一管三蒸水的顺序依次洗涤研磨钻头（每管5秒），再研磨组织，上下且圆