工业微生物育种学 贾.pptxVIP

工业微生物育种;化学诱变剂——脱氨剂（亚硝酸为例）;工业微生物育种学;化学诱变剂——脱氨剂;化学诱变剂——脱氨剂（亚硝酸为例）;二、亚硝酸的诱变机制;当用亚硝酸引起碱基脱氨基作用， 由Ａ变成Ｈ时，第一次DNA复制后次黄嘌呤不与胸腺嘧啶配对，而与胞嘧啶配对第二次复制后由A：Ｔ转换为Ｇ：Ｃ 。如下图所示 ; 由Ｃ变成Ｕ时，第一次DNA复制后尿嘧啶不与鸟嘌呤而与腺嘌呤配对，第二次复制后由Ｇ：Ｃ 转换为A：Ｔ。如下图所示 ;从以上诱变机制中可以看出，亚硝酸处理微生物时，可使腺嘌呤和胞嘧啶脱氨基后引起碱基 A：Ｔ 转换为Ｇ：Ｃ 和 Ｇ：Ｃ 转换为 A：Ｔ因此，亚硝酸的诱变也可以发生回复突变。 ;亚硝酸除了脱氨基作用外，还可引起DNA两条单链之间的交联作用，阻碍双链分开，影响ＤＮＡ复制，从而导致突变。如下图所示 ;三、亚硝酸的处理方法;; 2.处理方法（以处理浓度0.025mol/L为例） 取孢子悬液1mL，pH4.5醋酸缓冲液2mL及0.1mol/L 亚硝酸钠溶液1ml，最后处理浓度为0.025mol/L。于25~26℃保温10~20min，加入0.07mol/L、pH8.6的磷硝酸氢二钠溶液20ml，使pH下降至6.8左右，以终止反应，稀释分离于平板.;如果是处理细菌，亚硝酸最后浓度以0.05mol/L为例，将斜面新鲜菌体移入肉汤培养基，适温培养到对数期，将培养液进