7 第七讲(2 )植物组培操作技术.ppt

灭菌室的设置及配备 灭菌方法 高温湿热灭菌 干热灭菌 过滤灭菌 化学灭菌 紫外灭菌 多数细菌和真菌的营养细胞在60℃左右处理15min后即可杀死。 酵母菌和真菌的胞子要耐热些，要用80℃以上的温度处理才能杀死。 细菌的芽胞更耐热，一般要在120℃下处理15min才能杀死。 高压湿热灭菌 121℃，0.105MPa ，20min 湿热灭菌法比干热灭菌法更有效。在相同温度下，湿热的效力比干热灭菌好的原因是： ①热蒸汽对细胞成分的破坏作用更强。水分子的存在有助于破坏维持蛋白质三维结构的氢键和其他相互作用弱键，更易使蛋白质变性。 ②热蒸汽比热空气穿透力强，能更加有效地杀灭微生物。 接种室的灭菌 接种室的设置和配备 超净工作台的灭菌 1、擦工作台面 2、开风机，打开紫外灯20min以上 3、用75%酒精洗工作台面 接种器皿、用具的灭菌 用具先用95%酒精浸泡，后于酒精灯外焰灼烧 防止空气污染 接种时在近火焰处打开瓶口，使瓶倾斜，以免空气中微生物落入瓶中 防止操作带来的污染 A、整个接种操作 动作要迅速 B、接种过程中尽可能达到悬空要求 C、接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口 D、瓶盖朝上放，接种完毕后立即盖好瓶口 分布均匀 外植体必须与培养基紧密接触，且在培养容器内均匀分布，以保证营养的充分利用，以及光照条件均匀一致 试管苗的生长环境 无菌 异养 弱光 恒温 初代培养常用的培养部位 芽（单芽、丛芽） 愈伤组织 继代培养 无菌短枝 丛生芽 愈伤组织 移栽前的工作 （1）培养瓶壮苗 加入生长控制剂，如多效唑， B9， CCC，其作用是使苗粗壮，叶绿素增加。 移栽前的工作 （2）炼苗 将瓶盖打开，打破无菌环境，湿度逐渐下降，光照逐渐加强，使之形成新的功能强的根和叶片。一般炼苗时间为10—30天。 移栽时应注意的问题 （1）防止菌类滋生 　　 ①苗底部培养基要洗干净 　　 ②杀菌剂处理苗的根部 　　 ③定时用杀菌剂处理种植基质 　常用杀菌剂：KMnO4，百菌清、多菌灵、 第四节　组培快繁的计划安排 要确定（或限制）增殖瓶数 考虑增殖与移栽的比例。 快速繁殖由提高增殖倍数、缩短增殖周期，周年生产三因素决定。 实行有效的管理办法，达到人力物力的协调，从而提高生产效率 人力、物力的优化 复习思考题： 1 植物材料灭菌的步骤 2 实验室灭菌技术 3 为什么对培养基灭菌？ 正 确 错 误 种子和分生组织：培养时通常将其贴放在培养基表面，而不是插到培养基内部，以免供氧不足 正 确 错 误 接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形态学上端露于空气中 正 确 错 误 第二节 培养和驯化 一、培养 二、移栽驯化 ◆ 一、培 养 1.初代培养◆ 2.继代培养◆ 3.生根培养◆ 培养步骤 ◆ 茎段 茎尖 叶片 微型扦插 定芽的发育 顶　芽 激素刺激 带芽的茎切段 侧　芽 接种培养 形成的茎梢节长，直立向上呈小灌木丛状 获得较多嫩茎梢 茎段培养继代扩繁 试管苗 生根培养 无愈伤组织产生 初　代 继　代 不定芽的发育 脱分化 分　化 愈　伤　组　织 芽、芽丛 切割芽丛 大量芽丛 试管苗 生根培养 外植体 切割 分离 分离 生根培养 （2）保持小苗水分供给平衡 移栽时应注意的问题 (3)移栽时选择合理的种植基质 基质要疏松透气，有适宜的保水性，易于灭菌处理，不利于杂菌滋生：常用珍珠岩，椰糠，蛭石，细沙，泥炭。 移栽时应注意的问题 泥炭 珍珠岩 椰糠 (4)注意一定光照，温度条件 一般强度较高的慢射光较好 移栽时应注意的问题 第三节 试管苗增殖率的估算 Y=xn 年增殖率 全年增殖周期数　n=365/每周期天数 每周期增殖倍数 例如：增殖周期为1个月，增殖倍数为3， 　　　则年增殖率为312 * 第一节 灭菌和接种 第七讲 植物组培基本操作技术 第二节 培养和驯化 第三节 试管苗增殖率的估算 第四节 快速繁殖工作的计划安排 第一节 灭菌和接种 一、灭菌 二、无菌操作 三、接种 1.培养基灭菌 2.玻璃器皿灭菌 3.接种工具灭菌 4.实验服、口罩、滤纸